“纳米细菌”与疾病的研究进展.pdfVIP

邀生 壁 年9月第3卷第3期 JournalofMicmhes衄．dh 6on “纳米细菌与疾病的研究进展 区德明 廖贵清 20世纪80年代后期，芬兰科学家Kajander等在 Nil的分离、培养与鉴定 进行哺乳动物细胞培养时，用透射电子显微镜扫描 检查时发现细胞 内存在一种超微结构。1990年他 通常采用纳米孔径滤膜法分离 NB，采集血液、 正式将这种 原核微生物命 名为 “纳米细菌” 尿液、唾液或去矿化结石的离心沉淀物，高温灭菌后 (nanobacteria，NB)，并申请了专利，后来将其称为 “钙 经0．22tan滤膜过滤，生理盐水稀释 5倍，1500r／ 化性纳米颗粒”(calcifyingnanoparticles，CNP)。NB能 min离心45min，取管底溶液，经 0．22tan滤膜过滤 在菌体周围产生矿化外壳，作为结晶核心，导致被感 至细胞培养基 中，在 37℃、pH7．4、5％C02：95％空 染组织或细胞发生病理性钙化。NB及其生物矿化 气条件下培养 。培养状态下的NB可用 4O0倍相差 作用的发现，为人类多种病理性钙化疾病的研究提 显微镜观察其生长情况；用 DNA荧光染料 (Dapi或 供一个新的切入点，越来越受国内、外学者的关注。 Hoechst)按普通细菌 DNA染色的条件对 NB的DNA 由于体积显著低于理论上细菌的下限，其存在与否 进行染色均不成功，而当按照线粒体DNA以及病毒 引起了广泛争论，成为当前研究的一个热点问题。 DNA染色条件对 NB的DNA进行染色时，可观察到 本文对 NB的生物学特征、与疾病的关系及存在 的 特征性荧光；用 NB特异性抗体进行荧光染色也可 争议等作一综述。 清晰地显示 NB的存在；利用电子显微镜对经负染 的NB进行观察，可以清晰地显示单独或聚集成簇 Nil的微生物学特征 的NB以及其表面的生物被膜结构；而用透射 电子 NB属革兰阴性菌，呈球状或球杆状，无荚膜与 显微镜对NB的超薄切片进行观察，可以清晰地显 鞭毛，直径 80～500Bin，能通过 0．22tan的滤膜 ，菌 示其内部结构 J。 体周围有一层厚薄不一的矿化外壳。DNA基因序 列分析表明，NB与蛋白细菌家族 亚群的布鲁菌、 NB的生物矿化作用 巴尔通菌同属，具有相同的 16SrRNA片段。NB新 在不含血清的培养基 中培养 NB，1周 内可见 陈代谢率极慢，仅为大肠埃希菌的1／10000，在有血 NB周 围形成几微米厚的生物被膜 ，且紧紧贴附于培 清和无血清的细胞培养基中，NB平均倍增时间分别 养瓶底部，2 3周后生物被膜明显增厚。用能量色 为3d和6d。NB的矿化外壳使其在高温、强酸等 散型 x线分析 (energydispersiveX．mymiemanalysis， 条件下仍能存活，高剂量 7射线 (25～35kGy)在室 EDX)法对生物被膜的化学组分进行分析，显示钙磷 温下照射 16h，能抑制其生长L1J。许多抗生素治疗 峰值与羟基磷灰石极其相似 ，电子显微镜观察 以及 对其无效或在超出生理浓度下才能起抗菌作用，但 傅立 叶转换 红 外 频谱 (Fouriertransform infrared 四环素、呋喃妥英、甲氧苄啶等能在生理浓度下起灭 spectroscopy，丌m)分析显示，其主要成分为碳酸羟 菌作用，而氨苄西林、氨基糖苷类及万古霉素能在生 基磷灰