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农林科学 纤维素酶的研究进展与发展趋势 【摘 要】 【关键词】 纤维素是植物细胞壁的主要成分，广泛存在于自然界，是地球 进入 21 世纪，纤维素酶的研究也进入了一个全新的时代，其 上最丰富、最廉价的可再生资源。随着世界人口的增长，为解决日 发展趋势表现为采用现代生物技术，构建高产基因工程菌株，从而 益加剧的食品和能源危机，纤维素资源的利用引起了世界各国的极 使纤维素酶的工业化生产和大规模应用得到突破性进展。 大关注和高度重视。纤维素酶能够有效地分解天然纤维素，是解决 物理诱变育种。紫外线诱变育种是国内外广泛采用的提高菌种 能源危机，食品和饲料紧张及环境污染等问题的重要途径之一。 性能的育种方法，已经应用此方法选育到很多优良突变株。它具有 损伤轻、突变频率高、突变谱宽、突变性状稳定等突出的优点，因 此可望通过此项新的育种技术获得期望的诱变菌株。 在自然界中，绝大多数的纤维素是由微生物通过分泌纤维素酶 采用原生质融合技术。里氏木霉能大量合成外切葡聚糖纤维二 来进行降解的。早在 l850 年，Mifscherlich 己经观察到微生物分解 糖水解酶（CBH）、内切葡聚糖酶（EG）。但是纤维二糖酶（CB） 纤维素现象。但纤维素酶的研究则是从 1906 年 Seilliere在蜗牛消化 活力低，而黑曲霉的 CB 活力高。为了充分开发利用里氏木霉和黑 液中发现了分解天然纤维素的酶，以后才逐渐开始的。1912 年 曲霉这两个远源属种间的互补优势性状，可将里氏木霉和黑曲霉进 Pringsheim 从耐热性纤维素细菌中分离出纤维素酶。1933 年 行原生质融合，筛选到的融合子获得了两属的优点。但是，对原生 Grassman分辨出了一种真菌纤维素酶的两个组分。1954 年，美国陆 质融合使微生物获得新性状的机制的研究至今还很少，融合子的遗 军 Natick实验室开始研究军用纤维素材料微生物降解的防护问题， 传稳定性还并不太理想。 后来发现纤维素经微生物降解后，可产生经济、丰富的生产原料， 基因工程育种。由于以分子克隆为基础的基因重组技术的快速 并且有望解决自然界不断产生的固体废物问题，于是纤维素酶得到 发展日趋成熟，国内外的研究者已开始应用重组 DNA 技术对纤维 了广泛的关注。 素酶产生菌进行改造或创造新的纤维素酶产生菌。与前两种育种技 50 年代，纤维素酶工作转向纤维素酶本身的性质、作用方式、 术相比，基因工程育种具有很好的定向性，为构建高效纤维素分解 培养条件、测定方法等研究。l958 年，美国华盛顿大学 Fry 等人用 菌开辟了新途径，最有可能使纤维素的分解利用问题得到突破性解 酶水解非淀粉多糖，从那时起，纤维素酶的研究在世界许多国家迅 决。纤维素酶基因克隆的研究始于 20 世纪 70 年代，现已从 20 多 速推广，特别在产纤维素酶的微生物选育、培养条件、纤维素酶的 种细菌及数种真菌中克隆到酶基因并对它们进行了测序。大部分的 性质、纤维素酶的分离、提纯和协同作用方面的研究进展较快。 EG 基因都以羧甲基纤维素为底物，利用刚果红平板法筛选；而 GL 60~70 年代，Nisizawahe Woo 等人对绿色木霉和黑曲霉的纤维素酶 基因一般通过产色物质如对硝基苯葡萄糖苷为底物，在平板上直接 做了大量的研究，将纤维素酶分成不同组分，并进行了鉴定。70~80 筛选。另外，反刍动物瘤胃微生物对纤维素的转化率也比较高。利 年代开始利用诱变等育种手段对产纤维素酶的微生物进行了改造， 用 DNA 重组技术将这些瘤胃微生物的纤维素酶基因在合适的受体 提高其产酶活性。80年代以后，人们开始利用遗传工程从分子生物 中表达的研究也取得了较大的进展。