暗间断延迟玉米开花与相关分子机理研究.pdfVIP

捅 要 玉米起源丁热带南美洲的墨西哥地区，短日的光周期条件才能诱导正常开花。虽然经 过了长期的人：【选择和自然进化，大多数温带玉米对光周期不敏感，但是多数热带玉米在 长日照光周期条件下，仍然表现出光周期敏感现象。光周期敏感是温带玉米育种中利用热 带种质资源的主要限制因素。所以，解析光周期敏感的机理对于玉米遗传育种研究就显得 非常重要。在短日植物的光周期诱导成花中，暗期是成花的决定因素，暗间断是在短日植 物生长发育的光周期敏感阶段，于暗期的中间短暂曝光，这种处理往往会抑制或延迟短日 植物开花。因此，利用暗间断处理也是研究玉米光周期敏感的一个重要方法。本研究利用 暗间断处理的方法，从表型和光周期途径信号传导的上、中、下游关键基因表达规律的变 化等角度，试图解析玉米光周期敏感的分子机理。本研究首先以热带和温带玉米自交系为 材料，分析了暗间断处理后玉米生长发育的特点：其次，克隆了玉米光周期途径上游光信 号受体光敏色素基因phyB2，通过荧光定量PCR分析该基因在暗间断处理前后48小时的 表达规律；最后，研究暗间断处理后光周期途径中控制生物钟的两个关键基因Hd6、 ZmCCAl以及信号输出关键基因GI-CO-FT的表达规律及其与玉米开花的关系。得出如下 几个研究结果： 1、将热带玉米自交系CML288和温带玉米自交系黄早四与B73种植在短日条件下(9 小时光／15小时暗)，在光周期敏感时期进行暗间断，观测抽雄期、散粉期、吐丝期以及株 高等的变化。结果表明，短日条件下连续暗间断处理后CML228抽雄期、散粉期、吐丝期推 迟，株高降低；黄早四抽雄期、散粉期、吐丝期提前，株高增加；B73抽雄期、散粉期、 吐丝期稍微推迟，株高略有降低。说明不同自交系对暗间断处理的反应不同，热带光周期 敏感自交系对暗间断处理最敏感。对4-8叶期晌不同发育时期暗间断处理进行比较发现， 热带敏感白交系CML288在4叶期暗间断处理与短日照下的花期等性状没有差异，而在5 叶期暗间断处理后抽雄期、散粉期、吐丝期推迟的天数最多，株高降低最大，说明5叶期 是暗间断敏感的关键时期。在光周期敏感的5—8叶期之间，随着暗问断处理天数的增加， 抽雄期、散粉期、吐丝期推迟的天数越多，说明暗间断处理具有一定的累加效应。用白光、 红光和远红光进行暗间断，发现红光的效应最大。红光的暗间断效应可以被随后的远红光 所逆转，表明光敏素是玉米主要的响应于暗间断的光接收器。 码一条1166个氨基酸残基的肽链，包含6个保守结构域。黄早四与CML288的phyB2基 因cDNA序列对比发现，一共存在17处单碱基的变异。其中，7处单碱基的变异引起了编 码氨基酸的变化，而且有3处差异位于PHYB2保守的结构域内。研究了phyB2在短日照 和暗间断后48小时内的表达节律。在短日照条件下，CML288叶片和茎尖中phyB2呈现双 峰的表达模式，其表达峰值出现在暗期结束时和进入暗期后第6时；暗间断处理后，phyB2 也呈现双峰的表达模式，但是其表达峰值比短日照条件下提前。在短日照条件下，黄早4 叶片和茎尖中phyBZ呈现双峰的表达模式，其表达峰值出现在暗期结束前的第3小时和暗 期开始时；暗间断处理后，phyB2的表达模式基本没有改变。 3、研究了白交系CML288和黄早四中生物钟基因Hd6、ZmCCAl24小时在叶片和茎 尖中短日照和暗间断处理后的表达规律。结果表明，在短日照条件下，Hd6基因在CML288 的叶片和茎尖中光期表达量较低，进入暗期后在叶片中开始上升，在茎尖中光期前第4小 时出现表达峰值；暗间断处理后，胱的表达量有所降低。在短日条件下，z珈CC4，基因 在CML288叶片和茎尖中表达峰值都是出现在光期后第4小时。暗间断提高了ZmCCAl 基因mRNA的积累，但是并没有改变这个基因在短日条件下的表达节律。 短日照条件下，一Hd6基因在黄早四的叶片和茎尖中的表达量从光期后第4小时开始升 高，在叶片中暗期后第3小时达到表达峰值，而在茎尖中光期前第4小时达到表达峰值。 暗间断处理后，Hd6基因在黄早四的叶片和茎尖中表达量降低，进入光期后很快就恢复为 正常短日条件下的表达规律。短日条件下，ZmCCAl基因在黄早四叶片和茎尖中表达规律 和CML288类似。暗间断处理提高了黄早四中ZmCCAl基因在暗期的表达量，但是在进入 光期以后，ZmCCAl基因的表达就近于正常。 4、CML288在短日照条件下，叶片和茎尖中的ZmGI在暗期前第3小时达到峰值；暗 间断处理没有改变叶片中ZmGI的表达节律，却提高了它的表达量，但茎尖中