蛹虫草多糖的分离纯化及促胆固醇逆向转运研究.pdfVIP

第39卷第 l7期 中圈中药杂畚 VSo1．39，Issue17 2014年9月 eptember，2014 蛹虫草多糖的分离纯化及促胆固醇逆 向转运研究 郭守东 ，崔英杰，王仁重，王仁远，武文雪，马腾 (山东省高校动脉粥样硬化重点实验室，泰山医学院动脉粥样硬化研究所，山东泰安271000) [摘要] 对蛹虫草子实体多糖进行分离纯化、相对分子质量测定 、单糖组成分析和体内胆固醇逆向转运活性研究。采用 阴离子交换色谱、分子排阻色谱分离纯化多糖 ，高效凝胶渗透色谱法测定相对分子质量 ，高效液相色谱结合柱前衍生法测定 单糖组成，同位素示踪技术评价胆固醇转运活性。最终获得 3种纯多糖组分 CMBW1，CMBW2和 CMYW1，糖含量依次为 87％，89％，95％，蛋白含量依次为6．5％，1．3％，2．8％，相对分子质量依次为772．1，20．9，13．2kDa；CMBW1由Man，G1一 cN，Rha，GlcUA，Glc，Gal和Ara构成，摩尔比例为7．25：0．17：1．29：0．23：6．30：11．08：0．79；CMBW2由Man，G1cN，Gal和 Ara组成，摩尔比例为2．40：0．16：2．92：0．24；CMYW1由Man，GlcN，GlcUA和 Glc组成 ，摩尔 比例为0．59：0．57：0．45：25．61； 蛹虫草多糖50mg·kg 即可显著促进 H一胆固醇向小鼠血液转运和经由粪便排出。所得3种蛹虫草多糖组分均为杂多糖 ，所 得蛹虫草多糖具有促胆固醇逆向转运功能。 [关键词] 蛹虫草多糖；分离纯化；单糖组成；胆固醇逆向转运 冬虫夏草具有抑制肿瘤生产、增强机体免疫力、 草子实体为原料，采用先进的柱色谱手段对蛹虫草 降脂、抗菌等功能；但冬虫夏草 自然资源稀少、价格 多糖进行分离纯化、单糖组成分析、相对分子质量测 昂贵、人工栽培困难等问题，制约着冬虫夏草应用推 定，并对蛹虫草中的多糖成分是否具有胆固醇逆向 广。蛹虫草 CordycepsmilitarisL．Link又名北虫草、 转运活性进行了初步研究。 北冬虫夏草等，其与冬虫夏草属于同属真菌，不仅具 1 材料与方法 有与冬虫夏草相近的生物活性，且易于人工培养。 1．1 材料 蛹虫草多糖是蛹虫草含量较高的生物活性物质之 1．1．1 试剂 蛹虫草子实体 (泰安市岱珍营养保 一 ， 研究发现蛹虫草多糖具有增强免疫 ¨、抗肿 健食品有限公司提供)；Q—sepharose FastFlow和 瘤 引、抗病毒、抗衰老、降血糖等多种功能。 SephacrylS200HR柱填料 (美 国GEHeahhcare)；葡 近年研究发现蛹虫草多糖具有类似于冬虫夏草 萄糖(Glc)，甘露糖 (Man)，半乳糖 (Ga1)，阿拉伯糖 多糖的生物活性 。蛹虫草多糖的单糖组成、相对 (Ara)，岩藻糖 (Fuc)，鼠李糖 (Rha)、核糖 (Rib)、葡 分子质量、糖苷键连接方式可对其生物活性产生重 萄糖醛 酸 (GlcUA)、半乳糖 醛酸 (GalUA)、木糖 要影响。单纯的水提醇沉法获得多糖的方法工艺流 (Xy1)、N一乙酰氨基葡萄糖 (GlcNAc)、葡萄糖胺 (G1一 程简单，但获得的多糖相对分子质量范围广，组成成 cN)、1一苯基一3一甲基_5一吡唑啉酮 (PMP)，乙腈，Dex— 分复杂，不利于多糖构．效关系的阐述，又不利于产 tran对照品(相对分子质量 1100．0，667．8，409．8， 品质量的控制 。2013年至今，先后有 国内外研究者 273．0，147．6，48．6，23．8，11．6，5．0kDa)购 于 报道了蛹虫草的降脂效果 剖，而胆固醇逆向转运是 Sigma-Aldrich；H标记胆固醇购于北京 (中国)同位 药物降脂的重要一环。本文以人工培养获得的蛹虫