大鼠肾脏糖胺聚糖的种类及二糖组成分析.pdfVIP

第30卷，第9期 光谱学与光谱分析 201 and 0年9月 SpectroscopySpectralAnalysis September，2010 大鼠肾脏糖胺聚糖的种类及二糖组成分析 王 皓，于广利。，赵 峡，郝 翠，李广生，王培培 中国海洋大学医药学院山东省糖科学与糖工程重点实验室，山东青岛266003 摘要采用两步酶解和离子交换色谱从Wistar大鼠肾脏中提取糖胺聚糖，以醋酸纤维素薄膜电泳分析糖 胺聚糖种类，以弱阴离子交换色谱分离各种糖胺聚糖。纯化后的糖胺聚糖分别经特定糖胺聚糖酶裂解，采用 强阴离子交换高效液相色谱(sAx-HPI￡)紫外检测分析其二糖组成。结果表明，Wistar大鼠。肾脏糖胺聚糖 主要由硫酸乙酰肝素和少量硫酸皮肤素组成。硫酸乙酰肝素含有8种二糖，其中含有乙酰基二糖总含量高 达77．6％，非硫酸化二糖(IV—A)含量为59．7％；硫酸皮肤素含有6种二糖，其中单硫酸化二糖总含量为 54．8％，非硫酸化二糖含量为32．9％。 关键词大鼠肾脏；精胺聚糖；种类；二糖组成 中图分类号：$854．4+3文献标识码：A DOI：10．3964／j．issrL1000-0593(2010)09—2484—04 只(体蕈200～230g)，青岛市药检所实验动物中心提供；透 引 言 明质酸(hyaluronic sul- fate，CS)、硫酸皮肤素(dermatansulfate，DS)、硫酸乙酰肝 糖胺聚糖(glycosaminoglycans，GAGs)是一类由不同的素(heparan 重复二糖结构单元组成的带有羧基和硫酸酯基的线性聚阴离 子长链分子，广泛存在于细胞表面和细胞外基质中。作为生 瓜蛋白酶，美国hlTlresco公司；软骨素类不饱和二糖标准 物体内重要的牛物大分子，糖胺聚糖通过与生物体内各种 品：△U 酶、生长因子及细胞黏附因子等结合，参与细胞增殖、分化 和免疫调节等重要的生物学过程[1～。 研究表明，在不同物种的相同组织中，以及同一组织不 同发育阶段，糖胺聚糖结构都小相同[s7|，尤其在病变组织 中，糖胺聚糖的含鬣和结构与iF常组织也存在较大差异[8]。 肾脏是动物的重要器官，其糖胺聚糖的结构和含量在肾脏病 变过程中发生显著变化[9—0|。因此，对肾脏糖胺聚糖的含 量、种类及其结构进行系统研究具有十分重要的意义。 本文以Wistar大鼠肾脏为研究对象，采J咐酶解法和色谱司；软骨素酶ABC(Chordroitinase 法从中提取纯化糖胺聚糖【11|，综合运用电泳和高效液相色 llase 111)，均为美国Sigma公司； I)，肝索酶Ⅲ(Heparinase 谱紫外检测法对其含鼍、种类及二糖组成进行分析，为动物 ZorbaxSAX色谱柱(4．6×250 组织中微量糖胺聚糖的种类和细微结构研究提供参考。 司。AG FF 和SephadexG10凝胶，瑞典PharmaciaBioteeh公司；醋酸纤 1实验部分 维素薄膜(7×9cm)，北京六一公司；其他试剂均为国产分析 纯。 1．1试剂与仪器 实验动物；lO～12周龄清洁级健康雄性Wistar大鼠4公司；3000Xi型电泳仪，美国Bio-Rad公司；T10hasic组织 收稿19期：2009—09-27。修订日期：2009—11-03 基金项目：国家海洋(863计划)项日(2007AA092445)和科技部国际合作