定量检测ProMBP双抗体夹心ELISA方法的建立.pdfVIP

维普资讯 南京医科大学学报(自然科学版) 第28卷第 7期 · 836 · ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING(NaturalScience) 2008年 7月 定量检测ProMBP双抗体夹心ELISA方法的建立 刘丽萍，孙丽洲 ，卞智萍，顾春荣，杨 笛 ¨，张寄南 (南京医科大学第一附属医院妇产科，心血管病研究所，江苏 南京 210029) [摘 要] 目的：建立定量检测ProMBP的双抗体夹心ELISA方法。方法 采用ProteinA亲和层析法纯化自制的抗ProMBP单 克隆抗体 (mAb)，并行SDS．PAGE和Westernblot对纯化抗体特性进行鉴定；利用简易过碘酸钠法对抗 ProMBPmAb进行标记 辣根过氧化物(HRP)后行抗体配对实验；通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度；以纯化的妊娠相关血浆蛋 白A (PAPP-A)／ProMBP抗原为标准品建立标准曲线；以重复性、灵敏性和回收性实验评价ELISA方法，初步对人血清中的 ProMBP水平进行检测。结果：最佳配对组合为抗 ProMBPmAb4C6EB，和HRP标记的抗 ProMBPmAb9G~6Gl0，最适工作浓 度分别为2．5~g／ml和 1：3000，该方法的批内、批间变异系数分别为4．6％一62％和4．6％一10．5％，灵敏度达2,0ng／ml，回收 率为92％一113％。正常非妊娠血清、9-11周妊娠血清、15-17周妊娠血清ProMBP水平分别为 (26．37±2．90)ng／ml、(357．71± 3360)ng／ml和(108877±58．I3)ng／ml。结论：建立了一种可用于检测ProMBP的双抗体夹心 ELISA方法。 [关键词] 定量检测；嗜酸性主要碱性蛋白前体；ELISA双抗体夹心 [中图分类号] Q789 [文献标识码] A [文章编号] 1007-4368(2008)07．836．05 EstablishmentofasandwichELISAforquantitativemeasurementofProMBP LIULi—ping，SUN I,i—ZhOU ，BIANZhi—ping，GU Chun—rong，YANGDi ，ZHANGji—nan (DepartmentofObsletric．(111dG，naecology，InstituteofCradiovaslulraScience，theFirstAffiliatedHospitalof NJMU，Nanjing210029，China) [Abstract] Objective：ToestablishasandwichElISAforquantitativemeasurementofProMBP．Methods：Anti—ProMBPmonoclonal antibodies(mAbs)prepare(1t)yourlaboratorywerepurifiedbyProteinA affinitychromatographyandanalyzedbySDS—PAGEand Westernblottingtotesttheircharacteristics．AllthemAbswerelabeledwithhorseradishperoxidasebysodium oxidationmethod，and antibodypairs wereperformedusinganti—ProMBPmAbascoatingantibodyandHRPlabeledanti—ProMBPmAbaslabeledantibody， whichoptimalconcentrationsweredefinedbytitration．StandardcurvewasperformedusingpurifiedPAPP—A／PmMBP tetramerand wasjudgedbysensitivity，reproducibilityandrecoveryrate，TheProMBPlevelsofserawe／cmeas