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44 微生物学杂志 2014年 lo月第34卷第5期 JOURNALOFMICROBIOLOGYOct．2014Vo1．34No．5 基因工程手段提高磷脂酰丝氨酸合成酶活性的研究 陈梦雪，卢欣睿，马 玉，孙明波，罗维佳，王培琪，章朦王月，张怡轩 (沈阳药科大学 牛命科学 生物制药学院，辽宁沈阳 110016) 摘 要 为了提高目的蛋白磷脂酰丝氨酸合成酶(PSS)的表达，使用rTaq酶从E．coliK12总DNA中PCR扩 增获得磷脂酰丝氨酸合成酶基因片段，将其重组于高效表达载体pET28b质粒，转入相应表达菌株进行表达， 收集菌体超声破碎获得含PSS的粗酶液，使用两相反应体 系进行生物转化，HPLC—ELSD手段进行酶活检测。 结果显示，重组菌株 中PSS的酶活力比对照有所提高，同时获得酶活力提高的突变基 因pssE210G。将突变基 因重组于更高效的表达载体pBAD—MCS，转入相应宿主菌株表达。结果显示E．coliTOP10(pBAD—MCS-pss)表 达的酶活性明显优于E．coltBL21(pET28b-pss)中表达的酶活性。以上实验结果表明，将 目的基因重组于高效 表达质粒有助于提高酶活力；组合到不同的表达质粒，酶活提高程度不同；磷脂酰丝氨酸合成酶基 因第 73位 氨基酸发生突变，对其酶结构和酶活力有直接 的影响。 关键词 磷脂酰丝氨酸合成酶 ；基因重组；同源模建；突变 中图分类号 Q78；Q814；R979．9 文献标识码 A 文章编号 1005—7021(2014)05—0044—05 dot：10．3969／j．issn．1005—7021．2014．05．008 ImprovementofPhosphatidylSerineSynthetase ActivitybyM eansofGeneEngineering CHENMeng—xue，LUXin—rut，MAYu，SUNMing—bo，LUOWei-jia， WANG Pet-qi，ZHANG Meng—yue，ZHANG Yi—xuan (Sch1． LifeSci．＆Biopharm ，ShenyangPharm．Uni．，Shenyang110016) Abstract Inordertoimprovetheexpressionofphosphatidylserinesynthetase(PSS)oftargetprotein，fragmentof genepsswasPCR amplifiedwithrTaqfrom E．coliK12totalDNA，followedrecombiningintoahighettectiveexpres— sionplasmidpET28bandtransferredintocorrespondingexpressionstraintoexpress．CrudePSSenzymesolutionof E．coliBL21(pET28b—pss)cellswascollectedthroughsonication，thenliquidsupernatantwasconductedbioconve— rsionPC toPS inatwo—phasereactionsystem andtheenzymeactivitywasdeternfinedbyHPLC—ELSD． Theresults showedthatactivityofPSSinrecombinedE．coltBL21(pET28b—pss)wasimprovedthanthatofthecontrolone， andatthesametimeobtainedan improved enzymeactivitymutatedgenepssE210G． Themutatedgenewasreeom— binedintoevenmoreeffectiveexpressionvectorplasmidpBAD—MCS andtransferredintoacorresp