新型异亮氨酸双加氧酶及其重组大肠杆菌合成羟基异亮氨酸.pdfVIP

化 工 进 展 2014年第 33卷第 11期 CHEMICALINDUSTRYANDENGINEERINGPROGRESS ·3037· 新型异亮氨酸双加氧酶及其重组大肠杆菌合成羟基异亮氨酸 付敏杰 ， 聂尧 ， 穆晓清 ， 徐岩 ， 肖荣 (江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122； 江南大学食品生物技术国家 重点实验室，江苏 无锡 214122；。罗格斯大学高级生物技术与医学中心，新泽西州 08854，美国) 摘要：异亮氨酸双加氧酶 (IDO)可特异性的转化底物 L．异亮氨酸 (L．Ile)生成4．羟基．L．异亮氨酸 (4-HIL)， 该产物具有促进胰岛素分泌的功能，可用于抗糖尿病、降胆固醇等。本研究结合了酶标显色和薄层层析 (TLC) 的方法从 自然界中筛到 了具有 IDO活性的菌株，并将该菌株中的目的基因ido克隆到大肠杆菌中，获得重组表 达菌株，并且验证该菌具有 IDO的转化功能。本研究优化 了转化反应体系和条件，同时通过30~C过夜温育菌体 细胞的方法，使该菌株全细胞转化合成4．HIL的产率达到 85％以上。 关键词：异亮氨酸双加氧酶；异亮氨酸；羟基异亮氨酸；生物转化：重组表达 中图分类号：O815 文献标志码：A 文章编号：1000—6613(2014)l1—3037—08 Doh 10．3969~．issn．1000—6613．2014．11．034 A novelisoleucinedioxygenaseanditsexpressioninrecombinant Escherichiacoliforsynthesisof4一hydr0xyis0leucine FUMinjie，NIEYao，MUXiaoqing，XUYan27XIAORong3 (SchoolofBiotechnology，KeyLaboratoryofIndustrialBiotechnologyofMinistryofEducation，JiangnanUniversity， Wuxi214122，Jiangsu，China；StateKeyLaboratoryofFoodScienceandTechnology，JiangnanUniversity，Wuxi214122， Jiangsu，China；CenterforAdvancedBiotechnologyandMedicine，RutgersUniversiyt，NewJersey08854，USA) Abstract：Isoleucine dioxygenase (IDO)could hydroxylyze L—isoleucine (L—lie)to produce 4-hydroxy．L—isoleuciner4-HIL)，whichincreasesglucose-inducedinsulinreleaseandisusuallyusedin pharmaceuticalswithantidiabeticandcholesterol—reducingproperties．Thestrainwith dioxygenase activitywasscreenedfrom natureviacombinationofreactioncolorationassayedbyspectrophotometer andthin—layerchromatography (TLC)．ThegeneencodingIDO (ido)wasclonedandexpressedin Escherichia coliand the constructed recombinant strain exhibited the function of isoleucine hydroxylation．The reaction conditionswere optimized and theyield oftransformation with the recombinantw