梅毒螺旋体重组蛋白Tp0965的表达与鉴定.pdfVIP

《中国医学创新》第11卷第33期(总第315期)2014年11月 论 著 Lunzhu 梅毒螺旋体重组蛋~Tp0965的表达与鉴定水 周秀萍① 杨长顺② 牛淑会③ 李树平① 阳大庆① 付祥① 曾铁兵③ 【摘要 】 目的：研究梅毒螺旋体 (Tp)重组蛋白Tp0965(rTp0965)的表达并鉴定其免疫反应性，为 进一步探讨其在梅毒血清学诊断与疫苗中的应用价值奠定基础。方法：构建 Tp0965原核表达重组体 pET一 28a(+)T／p0965，诱导转化宿主菌表达重组蛋 白，Ni—NTA亲和层析法纯化蛋 白，Westernblot鉴定其免 疫反应性。结果 ：成功构建了原核表达重组体 pET一28a(+)T／p0965，经诱导高效表达了一分子量约为43KDa 的可溶性重组蛋 白，纯化蛋 白纯度 95％；Westernblot显示该纯化蛋 白能被梅毒患者血清特异性识别。结论： 高效表达了可溶性rTp0965，该重组抗原有 良好的免疫反应性。 【关键词】梅毒； 梅毒螺旋体； Tp0965； 重组抗原 ExpressionandIdentificationofRecombinantProteinTp0965ofTreponemaPallidum ／ZHOU Xiu-ping， YANG Chnag-shun，NIUShu-hui，etaidM／edicalInnovationofChina，2014，11(33)：015—017 【Abstract】Objective：ToexpressandidentifyimmunoreactivityofrecombinantTp0965(rTp0965)proteinof Treponemapallidum(Tp)，providabasisforfurtherinvestigationofitssignificanceinsyphilisserodiangosisnadvaccine． Method：TheprokaryoticexpressionrecombinantpET-28a(+)／Tp0965wasconstructedandinducedtoexpress recombinantproteinswhichthenwerepurifiedwithNi-NTAaffinitychromatography．Western blotwasusedtoidentify immunoreaetivityofrTp0965．Result：TherecombinantpET-28a(+)／Tp0965wasconstructedsuccessfullyandasoluble recombinantproteinwithapproximate43KDamolecularweightwasexpressedefficientlyinE．eoliwithmorethan95％ ofpurity．Westernblotindicatedthatpurifiedproteinswereabletoberecognizedspeciallybypooledserafrom spy hilis patients．Conclusion：TherecombinantproteinTp0965isexpressedefficientlyinE．coliandhasgoodimmunoreactivity． 【Keywords】Spyhilis； Treponemapallidum； Tp0965； Recombinnatantigen First-author’Saddress：Hu’nanUniversityofM edicine，Huaihua418000，China doi：10．39690．issn．1674—4985．2014．33：005 近几年我 国梅毒发病率 已居各类性传播疾病 1 材料与方法 (STDs)首位，尤其是胎传梅毒和男一男同性伴艾 1．1 材料和试剂 滋病性梅毒呈显著上升趋势 [1-2]o早期诊断和研发有 1．1．1 菌株和质粒 Tp(Nichols)梅毒菌株、pET一 效疫苗对防治梅毒具有重要意义。随着梅毒螺旋体 28a(+)质粒及宿主菌均为南华大学病原生物学研究 (Treponemapallidum，Tp)全基 因组 的解析，一些具 所保存。 有诊断和免疫保护价值的重组抗原陆续被表达和评价 ，