ARV、REV与ALV三重RT-PCR检测方法的建立.pdfVIP

376 动物医学 毕研丽2王金良1，2郭广君1，2吕素芳1杨慧2宋峰2苗立中1’2沈志强1，2 滨州256600) (1．山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600；2．山东绿都生物科技有限公司，山东 补的引物。在建立各病毒单项RT—PCR技术的基础上，优化三重RT—PCR反应条件，建立了3种 病毒的三重l玎一PCR技术，用这3对引物对同一样品中的ARV、REV、ALV核酸模板进行三重 RT-PCR扩增，结果可同时扩增ARV的247 bp，REV的467bp的特异性片段， bp，ALV的675 而对其他6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明，该三重RT—PCR技术 能检出10 pg的ARV和lOpg的REV模板。用42份临床病料对本研究多重RT— Pg的ALV、l PCR技术和单项RT—PCR技术进行对比验证，结果显示，两者的总符合率为92％以上。表明建 立的多重RT—PCR检测方法。具有特异、快速、准确的特点，可用于对这三种病毒的同时检测和鉴 别诊断。 关键词三重聚合酶链反应；禽呼肠孤病毒；禽网状内皮增生病病毒；禽白血病病毒 我国雏鸡和青年鸡群中，由网状内皮增生病病 基因设计引物可建立ALV的通用检测方法渊。 毒(REV)，鸡传染性贫血病毒(CIAV)，禽呼肠孤病因此，为了更好地进行以上疫病的鉴别诊断和 疫情防控，建立一种针对ARV、REV和ALV的快 毒(ARV)，鸡白血病病毒(ALV)等不同的免疫抑 制性病毒多重感染诱发的免疫抑制性疾病越来越 速、敏感、特异的分子生物学检测方法具有重要意 常见，造成的经济损失日趋严重。鸡群的免疫抑制 义。多重PCR技术是近年来发展起来的一种可用 性病毒多重感染不仅影响鸡群的生产性能，更易导 于多种病原体检测的PCR技术，可以在同一反应 致多种其它不同的细菌性和病毒性继发性感染，且 体系中加入多对引物同时对多个目的基因进行扩 易造成对特定疫苗免疫反应的抑制作用【l-2】。禽呼 增，无论是用于检测单一感染病原的不同基因型， 还是用于检测两种以上混合感染病原，其敏感性和 reovirus，ARV)是呼肠孤病毒科正呼 肠病毒(avian 肠孤病毒属的成员，为无囊膜，双股的RNA病毒。 检测速度都优于传统的鉴别诊断方法，具有较高 病毒颗粒中的基因组有lO个不同的独立节段组 的实用价值，可直接用于临床检测，服务于生产阁。 成。其中对Sl节段研究的比较详细，而对其它节 为了满足对ARV、REV和ALV进行快速鉴别诊断 LTR基因 段的研究尚不深入。禽网状内皮组织增殖病是由 的需要，本研究针对ARVSl节段、REV 及ALVP27基因设计特异性引物，建立一种可用于 禽网状内皮组织增殖病病毒(Reticuloendotheliosis 上述3种病毒的三重RT—PCR诊断方法，为快速 virus，wv)引起的以网状细胞增生为主要特征的 鉴别诊断禽免疫缺陷病毒病奠定基础。 一组综合征，REV的LTR基因比较保守，用PCR 方法特异性的扩增出该基因，可作为REV流行病 1材料与方法 学的一种方法，同时亦可作为REV确诊一种手段。 Leukosis，AL)是由禽白血病病毒1．1参考毒株 禽白血病(Avian leukosis 禽呼肠孤病毒(ARV)、禽网状内皮组织增生 (Avian virus，姗引起的一种以