人血清白蛋白基因的打靶研究.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! ! %’ ! ! 年 月 !##$ !#$%% ’ *$+, - .# /%0$ , 12 *+,-. !##$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 人血清白蛋白基因的打靶研究 !# !$%#’ *’+,- ./ 0+1$ *#%+1 234+1 5# # ， 9 ! 9 9 9 9 9 孙世惠 ，周艳荣 ，陈红星 ，林艳丽 ，黄培堂 ，邓继先 ， 9 ! ! 9 ! ! 4R 4.1HGA1 ，SGTR U+DH/DC ，JGM GDCHV1DC ，WX U+DHW1 ，GR Y I01H +DC +D3 ZM Y [1HV1+D! 9\ 军事医学科学院生物工程研究所，北京 9###$9 ! \ 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室，北京 9###$9 ， ， ， 9\ 3$/#/ /% - .# /%0$ , 12 40+5%62 - 7#,#/+*2 7%5#0+, 80#%$0% .%#9 #$1 9###$9 !#$+ ， （ ）， ， ! \ 3$/#/ /% - 7#0* :# , 12 +$5 ; #5%6# , 12 8/+/% %2 +: *+/ *2 - ?+/ 1%$ +$5 .# %0 *#/2 40+5%62 - 7#,#/+*2 7%5#0+, 80#%$0% .%#9 #$1 9###$9 !#$+ 摘 要 为获得整合有人血清白蛋白（ ）基因的猪胎儿成纤维细胞克隆，从猪基因组文库中杂交筛选得到猪血清白蛋白 G4 （ ）基因全序列 并克隆了人血清白蛋白 序列，扩增猪血清白蛋白基因 调控序列 片段及第一内含子至第 I4 P @8 -Z P] $ \!@8 四内含子 的片段；构建了含有 及 正负筛选标记基因的人血清白蛋白基因打靶载体，并验证了 基因的有效性。 ! \F@8 $% /@ $% 将线性化的打靶载体通过电击转染的方法整合到猪胎儿成纤维细胞基因组中，利用Y:9F 及Y J 进行细胞克隆的抗药性筛 选， 及 鉴定抗药性细胞克隆，最终获得 个发生同源重组的细胞克隆。这为下一步进行体细胞核移植制备生 IJ/ 4A6.0,D 8’6 产人血清白蛋白转基因猪奠定了基础。 关键词 基因克隆，基因打靶，人血清白蛋白基因 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） ^$P 9###H#;9 !##$ #!H#!!H#; （ ）， 246’%$7’ C0D0,+60 6,+D C0D1- 5,-1D0 ?.1-. 0O5,0 0 .A7+D 0,A7 +’8A71D G4 6.0 G4 C0D0 6+,C061DC 20-6, ?+ （ ） -D 6,A-603 ?16. G4 -Z + 6.0 C0D0 E 1D60,0 6+D3 5+,61+’ 5,-1D0 0,A7 +’8A71D I4 C0D0 + .7’CA +,7 ?.1-. ,0 50-6120’B ?0,0 $ \!@8 P] ,0CA’+61D 0_A0D-0 +D3 ! F @8 C0D71- 0_A0D-0 E,7 6.0 E1, 6 1D6,D 6 6.0 EA,6. 1D6,D .0 ,0 1 6+D6 C0D0 $% ?+ 1D 0,603 1D6 1D6,D 9 +D3 /@ ?+ ’1C+603 6 6.0 ] 0D3 E 6.0 -D 6,A-6 W1D0+,1‘03 6+,C061DC -D 6,A-6 Z + 1D6,3A-03 1D6 6.0 E18,8’+ 6 -0’’ 86+1D03 E,7 5,-1D0 E06A 8B 0’0-6,5,+61D .0 5 16120HD0C+6120 0’0-61D ?+ 50,E,703 +D3 A,212+’ -’D0 ?0,0 -,00D03 8B IJ/ +D3 4A6.0,D 8’6 .,00 -’D10 ?16. -,,0-6 .7’CA ,0-781D+61D 0,0 86+1D03 TA, ,0 A’6 06 + C3 8+ 1 E, 6.0 0 6+8’1 .70D6 E 6,+D C0D1- 5,-1D0 8B