甘油糖脂UPLC-Q-TOF-MS研究.pdfVIP

第27卷增刊 分析测试学报 V01．27 FENXICESHI ofInstrumental 2008年11月 XUEBAO(JournalAnalysis) NOV．2008 PLG—Q-TOF—M 甘油糖脂的U S研究 陈德莹，徐继林，严小军，李海英 (宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室，浙江宁波315211) 糖脂是植物光合膜脂的主要成分…，在影响光合作用的效率旧。】、帮助植物体适应生态条件的改 变14]等方面起着非常重要的作用，糖脂及其降解产物在抗肿瘤活性f5“1及影响细胞凋亡、分化、衰老 等方面的研究。91现在也越来越深入，所以研究植物膜糖脂具有十分重要的意义。由于市场上无法购 买到一个完全单一的标准糖脂，各大化学品公司以及专门提供脂类标准品的公司仅能提供TLC级别的 混合糖脂标准。只有清楚这些标准糖脂中每个成分的含量、结构，才能对植物膜脂中的糖脂进行深入 的研究。有研究者在使用标准糖脂时采用将脂类皂化衍生化后用GC—MS进行定性定量[10|，此方法无 法真正将标准品中的每个糖脂完全准确地定性定量。本文使用UPLC—Q—TOF—MS，对标准糖脂进行了 定性定量分析研究，以期为植物膜糖脂的进一步开发研究提供有效的工具。 1 实验部分 1．1仪器与试剂 ACQUITY超高效液相色谱分析系统，配置ACQUITY自动进样器；Q—TOFPremier高分辨四极杆与 UPLCBEH mm×2．1 飞行时间串联质谱仪(美国Waters公司)；ACQUITYC18色谱柱(50 mm，1．7“m) (美国Waters公司)；MassLyFIX 司)。二酰甘油单半乳糖脂(MGDG，50ms／5mL氯仿)、二酰甘油双半乳糖脂(DGDG，50mg／5mL氯 仿)、二酰甘油硫代糖脂(SQDG，25ms／5mL氯仿)的混合标准品(TLC，英国LipidProducts公司)；抗 ar- 国Tedia公司)；纯水由超纯水系统制备。 1．2实验方法 1。2．1 1 g／L糖脂标准品，加0．5mL含O．25 sn-2酰溶血糖脂的准备参考有关文献…J，20肛L mg TritonX．100的硼酸一硼砂缓冲液(pH7．7)溶解，添加80单位的LipaseXI酶(Rhizopusarrhizus)水解，37 ℃搅拌反应15min，特异水解糖脂的sn-l位脂肪酸，加0．5mL乙腈终止反应，一20℃冷冻过夜(大于 12 h)，取有机相上机分析。 腈一异丙醇(体积比95：5)(B)，流速0．3 中加入0．1％氨水；分析MGDG和DGDG时，正离子模式下流动相中加入0．001mmol／L的甲酸钠，负 离子模式下流动相中加入0．1％的甲酸。采用梯度洗脱：B在10min内从初始50％升至92％，保持9 min，再在lmin内降至50％平衡5 min，在2min内升至100％，保持4 min。采用等度洗脱时，测定 标准糖脂的洗脱比例为1：9(A：B)，测定sn-2酰溶血糖脂的洗脱比例为58：42(A：B)。 质谱条件：采用电喷雾电离源离子源温度100℃，脱溶剂温度250℃，脱溶剂氮气流速400L／h， 200～l 锥孔反吹氮气0。四极杆扫描范围m／z 200。TOF离子飞行方式采用V模式。使用亮脑啡肽作为 外标物对目标离子进行精确质量锁定。测定SQDG时，采用负离子电离模式，毛细管电离电压2．5kV，