VEGF-C在宫颈癌抗凋亡分子机制中研究.pdfVIP

发现，当外加脉冲的瞬时场强高于1KV／CM时，脉冲电场可引发细胞膜依次出现“可逆性电穿孔”及 “不可逆性电穿孔”。传统的肿瘤电化学治疗，利用较低能量直流电的“可逆性电穿孔”效应辅助非渗 透性化疗药物如博来霉素等进入细胞内，发挥化疗增敏的作用以治疗肿瘤。而脉冲电场治癌则彻底 摒弃了化疗药物的毒副作用，单纯依靠“不可逆性电穿孔”效应，击穿细胞膜直接杀伤癌细胞。其机 理有二：(1)细胞膜的孔洞部位出现断裂，导致巨大空洞的产生：(2)巨大的空洞使微粒流入和流 出细胞膜，导致离子泄漏、细胞膜内外化学平衡被打破，使细胞的生存环境发生剧变。本研究则寻 对SKOV3的抑制效应。本文所用的脉冲电场发生仪，已证实能使肿瘤细胞发生不可逆性电穿孔，从 而导致肿瘤细胞的直接死亡。 本研究证实，脉冲电场能有效抑制离体SKOV3的增殖效应：超微结构分析显示脉冲电场不可 逆的破坏并杀伤SKOV3。且有诱导瘤细胞凋亡的作用，这与本课题组前期研究结论一致。同样，脉 冲电场处理后的BALB／c裸鼠Skov3皮下移植瘤，光镜下可见瘤细胞出现典型的核固缩、核碎裂、 核溶解样改变及大片坏死，与未处理组瘤灶形成鲜明对比；电镜下亦见肿瘤细胞显著的不可逆性损 伤：且可有效诱导在体瘤组织凋亡，进一步验证了体外试验的结论：脉冲处理还能显著抑制瘤组织 生长，于治疗后第15天两组肿瘤生长出现差别(P0．05)。这些均表明脉冲电场对离体肿瘤细胞或 在体瘤组织有确切的杀伤或抑制效应，较之手术，同样能达到去除肿瘤的目的。 笔者认为脉冲电场在肿瘤治疗上的应用前景取决于：对靶组织的有效杀伤、对邻近组织的安全 性及可控性、以及治疗后的转归。本研究表明单纯采用脉冲电场来治疗肿瘤是有效、可行的。试验 证实优于传统电化学治疗中采用的直流电治疗。对于人体较大瘤体，可采取布置多电极、增加脉冲 电场的能量，亦可有效扩大杀伤范围，实现对瘤组织的可控性杀伤及周围正常组织的保护，取得良 好的杀瘤效应。本研究初步证实了脉冲电场技术有望成为肿瘤综合治疗中的新替代疗法之一，但尚 需通过大量的动物和临床实验来寻求最佳脉冲治疗剂量等一系列问题。 6、VEGF．C在宫颈癌抗凋亡分子机制中的研究 ‘浙江省台州医院妇产科(317000) 2中国医学科学院协利医科大学天津血液病学研究所(300050) 3天津医科大学总医院妇产科(300052) 陈 星1任虹平1吴为玲1陈彬彬1 郑灵芝1 吴朝阳1 熊冬生2许元富2杨纯正2糜若然3 宫颈癌早期就可发生淋巴转移，但共转移机制尚不清楚。近年来的研究发现，VEGF-C可介恃 淋巴管内皮细胞增殖分化，诱导淋巴管增生，促进肿瘤淋巴道的转移，被称为特异性淋巴管生成因 ·87· 顺铂敏感性的变化。 材料和方法 1．实验材料和仪器 1．1细胞与菌株 宫颈癌HeLa细胞株由中国医学科学院血液学研究所国家重点实验室药物室保存。从液氮罐中 天换液，每天取培养的细胞于倒置显微镜下观察细胞的形态和生长状况，4天后细胞融合，用含EDTA 胰酶(O．02％)消化传代，取2--3代细胞用于实验。 1．2试剂 (1)Trizol RNA提取试剂盒、M．MLV逆转录试剂盒为Invitrogen公司产品。 (2)Plasmidmini purificationkit购于QIAGEN。 (3)哺动物细胞表达载体pcDNA3．1、脂质体Lipofectamine2000、 (4)顺铂(cisplatin)购自山东齐鲁制药厂，MTT购自Sigma公司。 ELISA (5)HumanVEGF．C BMS297购于Bender MedSystem公司。 (6)DEPC、随机引物、dNTP、DMSO购自上海生物工程有限公司。 2．实验方法 2．1细胞转染 2．1．1质粒的纯化 mini kit操作手册进行。 小