2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞体外诱导培养及黄芪多糖干预研究.pdfVIP

陕西中医2011年第32卷第7期 921 2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞体外诱导培养及黄芪多糖干预研究+ 徐寒松△ 吴 青 谢晓云▲ 孔德明。 贵阳中医学院第二附属医院内分泌科(贵阳550003) 摘 要 目的：探讨黄芪多糖(Astragalus 的影响。方法：密度梯度离心法获取T。DM患者与健康人外周血单个核细胞，培养7d 细胞在鼠尾胶原包被的培养瓶中培养后呈梭形、铺路石样，表达内皮细胞的特异性 芪多糖(APS)显著增加T：DM患者EPCs的增殖能力，呈一定的量效与时效关系，在 强，24h达到高峰，48h时略有下降，但仍明显高于对照组。结论：鼠尾胶原可代替 EPCs培养中常用的纤维连接蛋白，是体外分离培养外周血EPCs更节省的一种方 法。APS在一定剂量和时间范围内能促进T。DM外周血EPCs增殖。 主题词 糖尿病／中医药疗法 黄芪 动物，实验 【中图分类号】R587．1【文献标识码】A 【文章编号】 糖尿病是由多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢 他汀类药物降脂治疗史。con组为体检中心经体检健康者。采 紊乱综合征。其慢性并发症严重影响患者生活质量，是糖尿病 集空腹外周血30mL／例，均获得献血者知情同意。所有献血者 患者致残致死的主要原因。糖尿病慢性并发症基础的病理改变 均排除炎症、近期外伤、手术史、皮肤溃疡、心血管、血液系统疾 主要是微血管病变和大血管病变，EPcs参与出生后血管新生 和内皮损伤后的修复过程[1]，因此，EPcs可作为组织工程中血正常对照。 管的种子细胞来源。但EPcs在正常人骨髓及外周血循环中数 1．2 药物与试剂 量较少，研究结果显示，从人外周血单个核细胞中分离出来的 EPcs仅为o．05％～o．1％[2]。其培养方法复杂，成本较高，给其 研究带来不便。本研究在EPcs的培养中以自行制备的鼠尾胶 原代替昂贵的纤维连接蛋白，并观察其培养细胞的效果，期望 以最低的花费获得能构建组织工程血管的足够的种子细胞。我 们的前期研究证实黄芪能促进正常及糖尿病条件下EPCs的 单克隆抗体(R8LD 增殖和分化∞“]，黄芪多糖(APS)是黄芪的主要活性物质，具有验动物中心。 保护胰岛B细胞、调节血糖及改善脂代谢和胰岛素抵抗的作 2方法 用[5~1“，但其对EPCs的影响目前未见报道。本研究通过观察 2．1 鼠尾胶原的制备 水合氯醛腹腔注射麻醉sD大鼠 APS对T。DM外周血EPcs增殖的影响，探讨黄芪多糖在糖尿后，剪下鼠尾浸泡在75％酒精中30min后，在无菌双蒸水中反 病血管并发症治疗中的可能机制。 复冲洗2～3次，在超净台内将鼠尾剪成小段，抽出尾腱置平皿 1 材 料 中，尽可能剪碎，将剪碎的肌腱浸入o．1％无菌醋酸中(每19尾 1．1 标本 T。DM的诊断参照1999年wH0诊断标准。 T：DM患者(T。DM组)及健康人组(con组)各20例，均来自中使肌腱充分溶解成为胶原溶液。再移入无菌离心管内4000r／ 南大学湘雅医院，T。DM组为内分泌科住院患者，人选患者无 min离心30min，取上清液分装入无菌小瓶，一20^C保存备用。可 以继续向离心后的沉淀中加入适量醋酸，重复以上步骤，以制 *基金资助：国家自然科学基金资助课题 备更多的鼠尾胶原。 贵州省优秀科技教育人才省长基金资助课题[黔省专合字 2．2 EPcs的分离、培养密度梯度离心法获取T2DM (2009)84号] △通讯作者：徐寒松 ▲中南大学湘雅三医院(长沙4lOooo) ◇贵阳中医学院(贵阳550000) 内，4d后首次换液，以后隔日换液培养至7d，收集贴壁细胞供 万方数据 922 陕西中医20¨年第32卷第7期 实验用