一株鸽源绿铜绿假单胞菌的分离与鉴定.pdfVIP

· 54· 《上海畜牧兽医通讯》2014年第4期 一株鸽源绿铜绿假单胞菌的分离与鉴定 赵振振1 许梦怡2 许静3 王彦红2’ (1扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室江苏 扬州 225009 2江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 江苏 扬州 225009 3江苏盱眙县兽医站江苏 盱眙211700) 【摘要12013年9月，镇江世业洲某鸽场鸽群暴发不明疫情，死亡率达到10％。对送检病死鸽 进行剖检，有气囊炎、肝脏呈古铜色、肾肿大而苍黄等症状。无菌采取肝脏，脾脏进行病毒分离，未 分离到病毒。无菌采取肝脏，成功分离到1株细菌，经分离培养、染色镜检、生化试验以及PCR分 析，确诊为铜绿假单胞茵感染。对分离茵进行药敏试验，结果显示所分离的铜绿假单胞菌对强力 霉素、多粘菌素等耐药，对氟哌酸敏感。 关键词：鸽；铜绿假单胞茵；PCR检测；耐药性 铜绿假单胞菌(Pseudomonas 有限公司。16SrDNABacteriaIdentificationPCR aeruginosa，PA) 又称绿脓杆菌，是假单胞菌属的一员，Gersard于kit购自Takara公司。 1882年从伤口脓液中首次分离到n3。铜绿假单胞1．2 病料来源 000 菌属条件性致病菌，在自然界分布广泛，空气、水、 2013年9月，镇江世业洲某养户饲养的1 土壤中均有存在。该菌对人和动物均有致病力，在 对美国王鸽发病，送至扬州大学动物医院就诊。户 人医临床上通常引起皮肤化脓性感染，尤其是烧烫 主叙述鸽子3月龄，刚从外地引进，未进行免疫，病 伤患者比3。在兽医领域，近年来报道的由绿脓杆菌 程已1周，使用强力霉素和氟苯尼考治疗无效。 导致的疫病主要有：规模化养狐场母狐的流产，羊 1．3 方法 的化脓性肺炎，雏鸡的败血症等，其他动物绿脓杆 1．3．1细菌的分离：无菌取病死鸽的肝脏，以烧红 菌病的报道也日渐增多。该菌给规模化养殖场造 的手术刀片烫烙其表面，用灭菌的剪刀在烫烙面剪 成了很大威胁∞3，另外该菌是造成实验动物污染的 一小口，再用经火焰灼烧的接种环自剪开部位插入 重要病原菌之一，在北京地区是实验动物微生物检 肝脏中，后在血平板上进行划线接种。置37℃温箱 测分离率最高的病菌“3。绿脓杆菌的毒素残留能引 中培养24h后，观察菌落形态，挑取有代表性的菌 起食物中毒，造成公共卫生事件∞3。同时，铜绿假单 落在麦康凯琼脂平板和普通肉汤培养基中培养。 胞菌的危害还体现在其耐药性上，某些血清型对亚 1．3．2病毒的分离：无菌取病死鸽肺脏和脾脏，用 胺培南以及第三代头孢菌素的耐药率可达50％以 组织匀浆机匀浆后将组织悬液反复冻融3次。冻融 000 上，因此一旦暴发感染，需注意针对性用药邛3。目 完成后将组织匀浆以8 r／min离心5min，吸上 前，关于鸽子感染铜绿假单胞菌的报道尚无，本试 清尿囊腔每胚接种0．2mI。，接种24h后每12h照 验从美国王鸽肝脏中分离到1株铜绿假单胞菌，并 一次胚，并测死胚的血凝价，96h未死的胚4℃过 对其相关生物学特性进行了研究，以期广大养鸽者 夜后测效价。 加强饲养管理，重视对鸽绿脓杆菌病的防制。 1．3．3生化试验：取纯培养的菌株按常规方法进 1材料和方法 行乳糖、葡萄糖、山梨醇等发酵试验以及吲哚试验、 1．1 材料 MR试验、V—P试验。发酵管置于37℃温箱中培养