草仙乙肝胶囊对LPS%2fD-galN致肝损伤保护作用研究.pdfVIP

第二届世界中医药学会联合会肝病专业委员会学术会议 I 草仙乙肝胶囊对LPS／D—gaN致肝损伤的保护作用研究 高杰李树臣 哈尔滨医科大学第二临床医学院 别先以草仙乙肝胶囊(2e,／Kg)、生理盐水O．3ml灌胃三天，观察24h生存率及病理改变；Lps5ug／kg，D—GaiN700mg／kg致 及TUNEL染色PCNA指数，统计学用SNK．q方法和x2检验随之采用Western 在保护组、非保护组、正常组小鼠的肝细胞浆及线粒体样本中的表达情况．结果肝衰竭模型中保护组24h生存率(75％) 测不到；保护组、非保护组、对照组细胞浆均表达Bax，而保护组线粒体标本表达的Bax蛋白显著低于非保护组，对照组则 不表达．结论草仙乙肝胶囊具有抑制LPS／D．GlaN诱导的肝细胞凋亡的作用，它不直接抑制WNF-a的产生而阻断凋亡进程， 而通过抑制Bid蛋白的活性片断tBid的产生发挥抑制凋亡作用。 关键词：草仙乙肝胶囊；肝细胞； 线粒体；凋亡； 草仙乙肝胶囊应用于乙肝的临床治疗已有多年。实验表明它对于鸭乙肝病毒DNA和小鼠肝炎病毒具 有抑制作用，但此前草仙乙肝在保护肝细胞凋亡方面的研究未见报道，本实验目的在于研究草仙乙肝保护 肝细胞凋亡的作用及在蛋白水平探讨其保护肝细胞凋亡的机制， 材料和方法 一、材料 1．实验动物：Balb／c小鼠，体重18．229，雄性，由哈尔滨医科大学动物试验中心提供。 2．实验试剂：草仙乙肝胶囊由延边延边大学草仙药业有限公司提供批号040305，用无菌生理盐水配成 EColi 一抗： 0127：B8(SIGMA)无菌生理盐水配成2pg／ml， 抗鼠Bax抗体，兔抗鼠Bid抗体(购自BD cruz)抗增殖 Pharmingen)兔抗鼠caspase一3多克隆抗体(santa cellnuclear PCNA)多克隆抗体(Neomarker 细胞核抗原(proliferatingantigen intercellularadhesion slCAM．1(serum 酸还原酶法)(南京建成生物工程研究所) Tanon成像系统，beckman生化仪 二、实验方法 324 会议交流 20ug／kg，D-GalN：700mg／kg腹腔注射观察24小时计算存活率． 草仙乙肝对LPS／D．galN致肝损伤的保护作用及机理的观察：小鼠按体重均衡进行随机分组，保护组8 只草仙乙肝按29／Kg灌药；非保护组8只给以生理盐水O．3ml，共3天。8只为正常对照。肝损伤模型参照 文献加以改动，腹腔注射致肝脏损伤剂量的Lps／D—GAIN：Lps5ug／kg，D—GalN700mg／kg。6h后麻醉下腋 固定24h，石蜡切片，进行制备肝细胞线粒体和肝细胞浆样本，以备WesternBlot检测．使用含200raM甘露 M 醇，70mM蔗糖，lmMEGTA，10mHEPES，0．1mM PMSF(苯甲基磺氟)的缓冲液【9】，具体步骤：将 4。C离心15m，收集上清作 小鼠肝脏放入6ml缓冲液中制备匀浆，以60094C离心10m收集上清以120009 4。C离心15m，即可得线粒体。 为胞浆，沉淀经缓冲液洗涤后60094C离心5m，取上清以120009 生化指标 1．ALT的测定使用beckman生化仪，单位U／L。 EXPERT软件拟合绘制标准曲线，将测量的样本值换算为浓度值。 3．NO的测定：使用硝酸还原酶法