打顶对烤烟烟碱累积与烟碱合成关键酶基因表达调控研究.pdfVIP

打顶对烤烟烟碱累积和烟碱合成关键酶基因表达调控研究。 代晓燕1’2 苏以荣1 魏文学1 范业宽2 陈香碧1 (1中国科学院亚热带农业生态研究所亚热带农业生态重点实验室长沙410125 2华中农业大学资源与环境学院 武汉430070) h、5h、24h和14d)烤烟烟碱合成关 摘要：在盆栽基质培养条件下，利用实时荧光定量PCR技术检测了打顶后(1 键酶基因表达的变化，并通过酶联免疫法分析了烟株内源激素的含量。结果显示，打顶能明显促进烤烟体内烟碱 的合成和累积，提高烟株的烟碱含量，并且烟碱浓度随打顶后时间的延长不断增加，特别是中上部叶片。PMT和 ODC是根中的特异表达基因，打顶町以诱导烟碱合成酶PMT、ODC在根系中的表达。打顶后叶中内源激素h姐 含量降低，根中增加。打顶后涂抹植物生长调节剂能够降低烤烟各部位烟碱含量和根中烟碱合成关键酶PMT和 ODC的表达。打顶后烟株内源激素水平变化可能是调控烟碱合成关键酶基因表达的主要原因，而PMT等基因的 过量表达促进根中烟碱的合成。 关键词：打顶；烤烟；烟碱；PMT；0DC 打顶是烟草栽培过程中提高产量降低养分损失的一项重要措施，但打顶导致烟叶中烟碱含量增加[1’2j。 烟碱是衡量烟叶品质的一项重要指标，也是使烟草具有商品价值的主要因素，其含量过高会损害人体健康。 oA～3．5 一般烟叶中的烟碱含量以1．5 oA之间为宜，最佳含量为2．5％，而我国烤烟烟叶烟碱含量普遍高于优 质烟的标准。近年来国内外烟草市场都力求生产出适量烟碱、高香气的优质烟，这对烟草种植业提出了新的 要求。同时，烟草作为高附加值的经济作物，其行业税收在我国国民经济中占有重要的地位，作为一种奢侈 品在短期内不可能被取消，因此，降低烟叶中的烟碱含量已成为烟草研究中必须解决的问题。烟碱主要在烟 草根中合成，然后经木质部转移到烟株的地上部。它是由一个甲基吡咯烷环和一个吡啶环所组成，甲基吡咯 烷环的合成主要通过腐胺在一系列酶的调控下进行的，在此过程中，腐胺氮甲基转移酶(PMT)、鸟氨酸脱羧 酸合成的，在此过程中喹啉酸磷酸核糖转移酶(QPT)是合成烟酸的主要限速酶。研究表明，打顶能够提高 腐胺的合成过程中关键酶PMT、ODC基因在烟草中的转录表达变化，以及它们与烟碱含量的关系还未见报 道。本文在盆栽试验条件下，利用实时荧光定量PCR技术研究了打顶后烟株体内PMT和ODC基因的相 对表达量，以及PMT和ODC基因表达变化与烟碱合成的关系，为迸一步控制烟叶烟碱含量、改善烟叶品质 提供理论依据。 1材料与方法 1．1试验材料 供试烟草品种为云烟87，将种子消毒、浸种，催芽后播于装有蛭石、珍珠岩、草木灰和适量化肥的塑料格 *基金项目：中国科学院知识创新重要方向项目“西南喀斯特烤烟生产标准化技术研究与示范”(KSCX2一Yw—N·48—1)和贵州省烟草专卖 公司科技计划项目”烟草钾素营养凋节刺技术推广应用”联合资助。 打顶对烤烟烟碱累积和烟碱合成关键酶基因表达调控研究 盘内育苗，至5叶1心时挑选生长健壮、整齐的烟苗进行移栽。 盆栽试验于2007年在中科院亚热带所网室中进行。采用黑色塑料桶，桶高31cm、直径33CITI，每桶装 基质16 即发酵好菜籽饼50g，磷酸二氢铵21．5g，硫酸钾49．5 d与基质材料混 g，硝酸铵15．8g，于移栽前7--10 匀。在移栽后第3周和第5周分别施用营养液一次，每株每次200 培养及处理期间保证基质的含水量在适宜烟株生长范围内，当腋芽萌发至0．5cm左右时用镊子小心抹去。 1．2试验处理 试验共分三个处理，即不打顶、打顶和打顶+生长调节剂处理，每处理栽烟12株。中心花开放时进行打 顶及生长调节剂处理，用灭菌过的刀片小心切去顶端组织，打顶后立即涂抹生长调节剂，用保鲜膜包紧，乳胶 圈周围固定，每株留叶24片(包括未展开叶)。生长调节剂采用本课题组配制的以提高烟叶钾素含量和降低 h、5h、24 d， 烟碱含量为