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DNA和蛋白质技术专题复习 典型例题： 例1.回答有关蛋白质分离和纯化的问题 （1）要获得血清蛋白的粗制品，必须将含有柠檬酸钠的血液进行 处理，然后将 装入透析袋中除去 。 （2）要获得血红蛋白，应如何破碎红细胞？ 。 （3）下图为血清蛋白通过醋酸纤维薄膜的电泳图谱，你认为含量最多的蛋白质是 ，含负电荷最多的球蛋白是 ，相对分子质量最大的球蛋白是 。 （4）电泳是目前应用最为普遍的 蛋白质的方法。 【解析】本题考查蛋白质分离和纯化的基础知识。 【答案】（1）离心 上清液 小分子物质 （2）加蒸馏水使其胀破 （3）清蛋白 -球蛋白 γ-球蛋白 （4）（分离）纯化 例2.在遗传病及刑侦破案中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。据图回答相关问题： （1）在相应的横线上写出引物Ⅱ，并在复制这一步骤中将引物Ⅱ置于合适的位置。 （2）在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA分子。 （3）若将作为原料的四种脱氧核苷酸用32P标记，请分析循环一次后生成的DNA分子的特点： ，循环n次后生成的DNA分子中不含放射性的单链占总单链的比例为 。 （4）PCR反应过程的前提条件是 ，PCR技术利用DNA的 原理解决了这个问题。 （5）在对样品DNA进行分析的过程中发现，DNA掺杂着一些组蛋白，要去除这些组蛋白可加入的物质是 。 【解析】（1）DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3’端延伸DNA链，所以引物就提供了3’端，子链延伸方向为5’→3’，引物I与b链部分碱基互补，引物Ⅱ则与a链部分碱基互补，且连接到a链的3’端，故引物Ⅱ的结构为5’—G—A—OH ，复制结果为：5’—G—G……T—C—3’ HO—A—G—5’ （2）经过一次循环后，产生的两个DNA分子分别含有引物I和引物Ⅱ。 （3）由于作为原料的四种脱氧核苷酸被32P标记，所以新合成的子链均含有放射性，一次循环后的两个DNA各有一条链含32P，若复制n次，共产生子链2 n×2，其中只有DNA母链不含32P，则其所占比例为2／（2n·2）=1／2n. （4）DNA复制是以两条母链为模板，按照碱基互补配对原则进行的。因此，首先要解旋，使两条母链的碱基暴露出来，才能按照碱基互补配对的原则把相应的碱基一个个地连接起来。只有解旋后，再以母链为模板合成一小段引物，引物才起作用。 DNA分子在80℃～100℃的温度范围内变性，双链解开成单链，当温度慢慢降低时，又能重新结合形成双链。 （5）本题考查了DNA中杂质蛋白质的去除，利用酶的专一性，应加入蛋白酶。 【答案】（1）5’—G—A—OH HO—A—G—5’ （3）每个DNA分子各有一条链含32P 1／2n （4）DNA解旋 热变性 （5）蛋白酶 例3. 红细胞含有大量的血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题： （1）血红蛋白提取和分离的程度可分为四步：______、______、______和______。 （2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。 ①加入柠檬酸钠的目的是_____。②该过程即样品处理，它包括____、_____、收集血红蛋白溶液。 （3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离。 ①透析的目的是__________________。②透析的原理是________________________。 （4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。 ①样品纯化的目的是______________________________。 ②血红蛋白有什么特点？_________。这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义______。 【解析】（1）血红蛋白提取和分离的程度可分为样品处理；粗分离；纯化；纯度鉴定四步；（2）柠檬酸钠是一种抗凝剂，能够防止血液的凝固；（