银杏查尔酮合成酶基因与苯丙氨酸解氨酶基因克隆及其表达.pdfVIP

银杏查尔酮合成酶基因与苯丙氨酸解氨酶基因克隆及其表达.pdf

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缩潞词表 缩写符号 英文全称 中文意义 尘堕竺迪竺一墅趔生曼堕!!! CHS Chalcone Synthase 查尔酮合成辩 PAL Phenylalanine Ammonia-lyase苯丙氨酸解氨酶 TAL Tymsine 酪氮黢解氨酶 Ammonia—lyase CTAB Bromid Cetyltrimethylammonlum十六烷基三甲基溴化胺 PCR Chain Reaction Potymerase 聚合酶链式反应 RACE cDNAEnd 快速扩增CDNA末端 Rapid锄plication TAIL-PCRThermal InterlacedPCR Asymmetric 燕不对称交镶PCR STS Stilbene 芪合成酶 Synthase ORF OpenningFrame 舞敖读玛框絮 Reading UTR Untranslated Region 非编码区域 摘 要 银杏(Ginkgo biloba)叶黄酮具有重要的药用价值,近年来对银杏叶黄酮的研 究,特别是如何提高银杏叶黄酮含量已成为研究的热点与难点。对于提高银杏叶黄 酮的相对百分含量的研究,前人已有大量的报道,事实证明采用生理生化途径调控 银杏叶黄酮相对百分含量是一种有效的方法。同时,利用植物基因工程技术对银杏 进行遗传改良或在分子水平上调控银杏叶黄酮合成途径中关键酶的活性,从而提高 银杏叶黄酮含量也是一种行之有效的方法。银杏叶黄酮合成代谢中涉及到十几种酶, 而查尔酮合成酶(CHS)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)是银杏叶黄酮合成代谢途径中 的关键酶。因而,开展银杏查尔酮合成酶和苯丙氨酸解氨酶的研究具有重要的理论 意义与实践价值。 本研究以此为基础,以银杏品种家佛手叶为试材,采用CTAB法提取DNA和 RNA。利用RACE技术从银杏中分离出查尔酮合成酶基因的cDNA全长序列,利用 1对简并引物分离出银杏苯丙氨酸解氨酶基因的部分序列,并利用半定量RT-PCR法 对其不同时期mRNA的表达与其活性变化以及黄酮积累的相互关系进行了初步的研 究,主要结果如下: 晰的主带,酶切效果较好,说明提取的DNA质量较好。抽提的RNA经电泳检测, 可见28srRNA和18srRNA两条主带;紫外吸收值测量,A260/A280接近2.0; 反转录合成的cDNA经RAPD扩增,出现清晰的条带,这些说明提取的RNA与 DNA纯度高,质量好。该法简便易行,适合于富含多糖、多酚植物材料的核酸提 取。 登录号为AY945936。 3.利用RACE技术从银杏中分离出类黄酮合成代谢的第一个关键酶基因CHS基因, 并命名为Gbchs,GenBank登录号为DQ054841。GbchscDNA全长共1608bp,该 个氨基酸。通过核苷酸和蛋白质序列多重比较发现:Gbchs

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