蝉拟青霉几丁质酶基因片段的克隆及其序列分析.pdfVIP

2009 年 22 卷 2 期 西 　南 　农 　业 　学 　报 Vol22　　No2 　　　　　　　　　　　　　　Southwest Ch ina Jou rnal of A gricu ltu ral Sciences 353 文章编号 : 100 1 - 4829 (2009) 02 - 0353 - 04 蝉拟青霉几丁质酶基因片段的克隆及其序列分析 1, 2 1, 2 2 2 朱振宇 , 梅 　利 ,朱国胜 , 刘作易 ( 1. 贵州大学 生命科学学院 ,贵州 贵阳　550025; 2. 贵州省农业生物技术重点实验室 ,贵州 贵阳　550006) 摘 　要 :通过对蝉拟青霉进行诱导产几丁质酶 , 采用 3 , 5 - 二硝基水杨酸比色法测定其酶活性 ,发现 :有 2 株不同采集地点的菌株 酶活力较强 。根据 Genebank 中多种真菌几丁质酶氨基酸序列的保守区设计引物 , 以蝉拟青霉基因组 DNA 为模版 ,通过 PCR 扩增 获得 2 个菌株的特异性 DNA 片段 :其中, GZAA S10. 0604 为 563 bp ,含有 3个内含子 ; GZAA S10. 060 1为 398 bp ,无内含子 。其对应 的氨基酸序列均具有几丁质酶 18家族的 2 个高度保守的活性区域 :几丁质结合区域 SXGG和酶作用活性位点 DXXDXDXE。 关键词 :蝉拟青霉 ;几丁质酶 ;序列分析 中图分类号 : S432. 4 + 4　　　文献标识码 : A Screen ing of Ch itina se A ctiv ity of P a ec ilom yces c ica da e and Ana ly sis of the Fragm en t from the Ch itina se Gene 1, 2 1, 2 2 2 ZHU Zhenyu ,M E I L i , ZHU Guosheng , L IU Zuoyi ( 1. School of L ife Science, Gu izhou U n iversity, Gu izhou Gu iyang 550025 , Ch ina; 2 Gu izhou l Key L aboratory for A gricu ltu ral B iotechnology, Gu izhou Gu iyang 550006 , Ch ina) Ab stract:B y u sing the m ethod of 3, 5din itro salicylic acid chrom atom etry, two isolates P aecilom y ces cicadae (M iq. ) Sam son were detected w ith h igh ch intinase activities under the inducing of colloidal ch itin. A p air of degenerate PCR p rim ers was designed based on the con served dom ain of ch itinase in other fungi. DNA fragm ents were obtained w ith PCR techn ique from each of the Paecilomyces cicadae strain. The se que