甘菊BADH基因启动子的克隆与瞬时表达分析.pdfVIP

园　艺 　学 　报 　2008, 35 ( 12) : 1787 - 1794 A cta Horticu lturae Sin ica 甘菊 BAD H 基因启动子的克隆与瞬时表达分析 1, 4 1 3 3 1, 2 刘振林 , 曹华雯 , 夏新莉 , 尹伟伦 , 戴思兰 (1 北京林业大学园林学院 , 北京 100083; 2 国家花卉工程技术研究中心 , 北京 100083; 3 北京林业大学生物科学与技 术学院 , 北京 100083; 4 河北科技师范学院园艺园林系 , 河北昌黎 066600) 摘 　要 : 为了给菊花 [D end ron them a ×g rand if lora ( R am at. ) Kitam. ] 的转基因育种提供诱导型启动子 , 借鉴 5 ′RACE策略 , 利用锚定 PCR 步移的方法克隆了甘菊 [D end ran them a lavandu lif olium ( F isch. ex Trau tv. ) M ak ino ] 甜菜碱醛脱氢酶 ( betaine aldehyde dehydrogena se, BADH ) 基因的 4 个启动子序列 , 分别命名为 DB P 11、DB P 12、DB P2 1和 DB P22 ( GenB ank 登录号 : DQ497620 ～DQ497623 ) , 序列长度分别为 1 230、 1 249、1 273和 574 bp 。4个启动子序列对应区域的同源性在 89%以上 。其中 DB P 12和 DB P2 1分別是甘菊 BADH 基因 D lBADH 1和 D lBADH2 ( GenB ank 登录号 : DQ011151和 DQ0 11152 ) 的启动子序列 , DB P 11和 DB P22为甘菊 BADH 基因家族中其它成员的启动子序列 。序列分析表明 , 上述启动子序列中均含有多处与 水分胁迫和脱落酸诱导相关的顺式作用元件 。在表达载体 pCAMB IA 13052 的基础上 , 用所克隆的 4个甘菊 BADH 基因启动子序列分别置换驱动其报告基因表达的 35 S启动子 , 建立了新的植物表达载体 。用其转化 农杆菌 , 并用叶盘法侵染甘菊 , 瞬时表达的结果表明这些启动子序列均具备驱动报告基因表达的功能 。 关键词 : 甘菊 ; 甜菜碱醛脱氢酶基因; 启动子 ; 克隆; 瞬时表达 中图分类号 : S 682 1+ 1　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 0513353X (2008) 12 178708 C lon ing and Tran sien t Expression A ssay of BAD H Gene Prom oter s from D en dron th em a lavan du lifo lium 1, 4 1 3 3 1, 2 L IU Zhenlin , CAO Huawen