分子生物学 教学课件 作者 郜金荣 主编 第三章 遗传物质维护 第三章 第一节DNA复制.pptVIP

尚辅网 尚辅网 第三章 遗传物质的维护 第一节 DNA复制 第二节 DNA损伤修复和基因突变 第三节 遗传重组 5. DNA Replication(DNA Duplication) 学习目标要求 掌握： （1）参与DNA复制的酶和蛋白质的种类及功能 （2）DNA复制的忠实性（保真性） （3）大肠杆菌DNA复制的分子机制 （4）真核生物和原核生物DNA复制的异同点 （5）转座及其机制 熟悉： （1）DNA复制的一般特点（生物化学讲过） （2）真核生物染色体端粒复制的生物学意义 （3）典型的真核生物转座子 了解： （1）真核生物DNA复制的分子机制 （2）真核生物染色体端粒复制的过程 3.1 The general Characteristics  of DNA Replication 复制子 基因组内能独立复制的单位称为复制子或复制单位；每个复制子都含有控制复制起始的起点和控制复制终止的终止点。 原核生物：单复制子（一个复制起点） 真核生物：多复制子（多个复制起点） 复制起点： 1.大肠杆菌的复制起点：oriC。 2.起始区序列十分保守；复制在起始阶段进行调控，一旦复制开始，就继续进行下去； 复制方向1.原核生物、真核生物细胞器DNA：双向复制2.真核生物染色体DNA：多起点复制3.病毒DNA多样性：环形、线形、双链或单链。 复制方式滚动环式复制D环复制θ形复制 3.2 Enzymes and relative proteins in DNA replication 双螺旋DNA的复制是DNA聚合酶催化的酶促反应过程。实际上，在复制叉进行复杂的DNA复制过程中，还需要其他许多相关的酶和蛋白因子的参与，如DNA解旋酶、DNA旋转酶、DNA单链结合蛋白、引发酶、连接酶、去除RNA引物的酶等。 3.2.1 DNA polymerase (pol) and its function DNA聚合酶(DNA polymerase)是指以脱氧核苷三磷酸为底物催化合成新DNA链的一类酶。原核和真核生物中都包含有多种DNA聚合酶的活动。只有它们中的一部分是真正参与了复制的；有的时候这些酶叫做DNA复制酶。其它的一些扮演了复制过程中的辅助角色并且或者参与了替换被破坏的序列的DNA合成的修复工作。 研究最清楚的是大肠杆菌中的DNA聚合酶，已鉴定了5种不同的DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ。 3.2.1.1 DNA pol Ⅲ and its function 1970-1971年，Korn.berg和Gefter先后分离出了DNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ。 DNA聚合酶Ⅲ是由多个亚基组成的蛋白质，亚基很容易解离。全酶由10个亚基构成，含有Zn原子。 DNA pol Ⅲ复杂的亚基结构使它具有更高的保真性(fidelity)、协同性(cooperativity) 和持续性(processivity)。 2. The catalysis reaction 以dNTP为底物，释放PPi获得能量 Mg 2+ 反应受模板指导 在链的3’-OH端延伸 延伸方向是5’ →3’ 新DNA与模版链互补 1955年，Kornberg 在E.Coli中发现DNA pol Ⅰ 。分子质量为10.3万道尔顿，单一肽链组成，多肽链中含一个Zn。DNA pol Ⅰ可被水解为一大一小两个片段。 2. Klenow片段的校正功能 小结：如何实现DNA复制的忠实性？ DNA复制过程中碱基配对受到双重核对： DNA聚合酶(DNA pol Ⅲ)对碱基的选择作用 3’ →5’外切核酸酶(Klenow片段)的校正作用 复制的修复系统（DNA损伤的修复） 3.2.2 DNA ligase DNA聚合酶只能催化多核苷酸的延长反应，不能使链的两个末端间共价连接。1976年不同实验室同时发现了DNA连接酶。 功能：催化双链DNA切口处的5’-磷酸基和3’-OH生成磷酸二酯键，反应需要能量。 DNA连接酶的催化反应 DNA ligase + NAD+/ATP ↓ 酶-AMP复合物 ↓+DNA AMP-DNA ↓ 相邻3’-OH对活化的磷原子发生亲核攻击 ↓→AMP 3