白介素发酵影响因素.docVIP

甲醇营养型毕赤酵母是一种公认的外源分泌蛋白和胞内外源蛋白表达的一个优秀的表达系统。它具有许多明显优点，其诱导分泌表达的启动子AOXl可用甲醇严格调控，其表达目标蛋白分泌到上清，不需复杂的破菌处理等。由于外源蛋白的分泌量与菌体浓度基本成正比关系，人们一般采用高密度培养来实现外源蛋白的高效表达 乙醇氧化酶(AO)()、葡萄糖一6．磷酸脱氢酶(G．6．PDH)并a异柠檬酸脱氢酶(ICDH)作为 甲醛途径、HMP途径和TCA循环的关键调节位点，其酶活的大小反映了代谢流在胞内 的分布以及迁移情况。本章分别考察了毕赤酵母在菌体生长阶段和甲醇诱导阶段上述三 种酶的活性变化，并以此为依据分析胞内的主要代谢特性。 第三章不同环境和控制条件下毕赤酵母表达HSA．IL．2的研究 3．1引言 对用毕赤酵母表达重组蛋白来说，无论重组菌的甲醇利用表型如何，甲醇浓度都是 一个决定性的因素。Katakural48】等认为甲醇浓度过高会抑制细胞生长，甲醇不足或饥饿 时将会导致生长不良和产物分泌的减少。在Ppastoris蛋白表达阶段分别维持甲醇浓度 在1．59／L、109／I,、179／L或3lg／L时，随着甲醇浓度水平的增加，比生长速率和甲醇消 耗速率减少，但外源蛋白的比产率增加，原因主要是由于甲醇抑制了细胞生长，而大部 分能量用于蛋白表达。毕赤酵母表达外源蛋白期间，甲醇一方面作为碳源构成细胞骨架， 使细胞生长；