角蛋白酶论文枯草芽孢杆菌角蛋白酶基因kerC在毕赤酵母中的表达研究.docVIP

角蛋白酶论文：枯草芽孢杆菌角蛋白酶基因kerC在毕赤酵母中的表达研究 【中文摘要】角蛋白酶(keratinase)是一种可特异降解角蛋白的蛋白酶类。近年来角蛋白酶在多个领域中具有良好的应用前景,特别是在饲料生产中,通过角蛋白酶作用将废弃羽毛降解后作为动物饲料的添加剂,充分利用废弃的羽毛蛋白资源,这将改善蛋白质饲料短缺的现状。本研究利用DNA重组技术将来自于枯草芽孢杆菌B-3的角蛋白酶基因kerC表达在巴斯德毕赤酵母X-33中,成功实现了角蛋白酶基因kerC在真核表达系统中的高效表达,并对其酶学性质进行了研究,主要研究结果如下：1.根据枯草芽孢杆菌B-3角蛋白酶基因kerC(GenBank No.:JN021789),设计去除信号肽并含有EcoRI和XbalI酶切位点的上下游引物,PCR扩增角蛋白酶基因kerC表达片段。测序表明,扩增kerC基因表达片段中3个碱基发生错义突变,致使3个氨基酸发生改变。对编码的角蛋白酶蛋白空间结构进行分析,发生改变的3个氨基酸部位未在其活性中心。2.将重组表达载体pPICZaA-kerC线性化后电击转化巴斯德毕赤酵母X-33感受态细胞,转化子经Zeocin的抗性筛选、PCR鉴定和酶活力测定,确定6株阳性转化子。重组菌株P.X.KC-9在以1%浓度的甲醇诱导培养108 h后,其酶活力最高,达到32.31U/mL,比活力为95.43 U/mg。3.测定该重