蛋白质质谱高通量分析平台的建立及其在子宫内膜异位症中的应用性的研究.pdf

浙江人。≯博卜’≯化论文 中义摘要 蛋白质质谱高通量分析平台的建立及其 在子宫内膜异位症中的应用性研究 浙江大学医学院附属二院肿瘤学王良 导师：张苏展 中文摘要 EM)是一种常见的妇女良性疾病，指 盆腔子宫内膜异位症(endometriosis， 异位子宫内膜累及盆腔腹膜及(或)盆腔内生殖器的病变，印子宫内膜腺体及间质细 胞生长在子宫腔以外的部位，这种组织学上完全良性的内膜组织可像恶性肿瘤一 样增生、浸润、扩散与转移，引起相应的临床症状。其常见的症状包括：痛经， 性交痛，不孕，肠道或泌尿道症状(排便困难、腹泻、便秘、甚至周期性便血、 尿频、血尿等)等，严重影响育龄期女性的生活质量和健康。子宫内膜异位症的 发病机制至今仍不清楚，目前尚无有效的早期筛查和特异的诊断方法。如何提高 子宫内膜异位症的诊断率尤其是早期诊断率已被公认为是改善其疗效和预后的关 键。若能提高早期子宫内膜异位症的诊断率，即可明显提高子宫内膜异位症的总 体治疗效果。因此，在无症状人群中用非侵入性手段筛检子宫内膜异位症，达到 早发现、早诊断、早治疗，是子宫内膜异位症的重要防治策略之一。由于是蛋白 质并不是核酸方为生命活动具体的执行者和体现者，因此，深入研究子宫内膜异 位症的发病机制，寻找特异性、灵敏性均佳的生物标志物用于诊断，尤其是早期 诊断，客观上要求在蛋白质组的水平上进行深入的探索。表面加强激光解吸电离- laser mass 飞行时间质谱(surface．enhanced time—of-flight desorption／ionization 究手段，该方法相对其他传统的蛋白质组学研究方法而言，具有能直接对临床的 标本进行检测，实现了高通量的质谱技术应用于临床样本检测的优点。生命科学 浙江人学博lj学位论义 中文摘要 的快速发展使人们从基因组学、蛋白质组学等研究领域中获得了大量的数据，仅 依靠传统的统计手段是无法处理这些数据的，生物信息学的发展更是为收集、存 储以及分析这些数据，并且从中获取有用的生物学信息提供了重要的手段。课题 旨在应用SELDI蛋白质指纹图谱和生物信息学技术从血清、在位子宫内膜、腹水 中筛选子宫内膜异位症的生物标志物并分别构建子宫内膜异位症的血清、在位子 宫内膜、腹腔液诊断模型，为探索子宫内膜异位症发病机制提供新思路。 第一部分子宫内膜异位症患者血清蛋白质指纹图谱模型的临床意义 正常女性的血清蛋白质指纹图谱，随机抽取其中2／3的血清标本(24例子宫内膜 异位症和20例正常女性血清标本)作为训练组，并建立诊断模型。然后，将余下 的l／3的血清标本(12例子宫内膜异位症患者样本和10名健康人血清标本)作为 实验组，进行交叉验证该模型。筛选出5个有明显表达差异的蛋白，其质荷比(m (20／22)。 第二部分子宫内膜异位症血清蛋白质质谱标准化分析平台的验证 本研究在第一部分的36例子宫内膜异位症患者血清标本中随机抽选16例作 为研究对象，3个月后用H4蛋白质芯片对上述16例子宫内膜异位症样本和16例 健康志愿者总共32份血清标本再次进行检测，本研究严格按照第一部分的血清蛋 白质质谱标准化实验方法。将前后两次结果进行对比，分析，比较两次不同时间 实验选择的作为诊断模型的蛋白质峰的值，结果发现统计差异显著的峰在两次不 同时间检测中都仍然差异显著，能够重复出来，而且各个不同的峰在两次不同时 间的检测中在子宫内膜异位症患者和健康人血清中表达高低也能够重复，验证了 子宫内膜异位症血清诊断模型的有效性。 浙江人学博I：学位论文 中义摘鹾 第三部分子宫内膜异位症患者在