狂犬病毒基因与其功能的研究.pdfVIP

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 23 狂犬病毒基因及其功能的研究 艾军郭霄峰 (华南农业大学兽医学院广州510642) 狂犬病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属，病毒核酸为单股负链RNA。病毒基因组约12kb，结构为3 leader-N-P-M-G·L一5 赖性聚合酶蛋白(L)，同时在G-L基因之间存在假基因(v)，为无功能性基因，Ⅲ。 1狂犬病毒N蛋白 共同包装后，N才被磷酸化，N的磷酸化在N，RvRNA的包装中并不扮演重要的角色。 狂犬病毒N蛋白能够引发T细胞反应，并能诱导特异性抗N抗体产生。其作用机制可能是N蛋 白能被抗原提呈细胞有效的提呈“。研究表明M：在N蛋白的C末端引入外源基因，共同表达于病毒。 其外源蛋白可以整合人病毒RNA，且能提高抗外源蛋白的抗体水平。同时发现N蛋白的C端在病毒的 复制和转录中并不是严格要求的。 2狂犬病毒P蛋白 狂犬病毒的RNA聚合酶是由磷蛋白(P)和大蛋白(L)共同组成。P蛋白不仅在病毒的装配中 起关键性的作用，同时是机体免疫系统产生IFN一“B的拮抗蛋白，它通过阻止病毒(RV)感染的细胞 (2)P蛋白c端的10个氨基酸虽然与酪氨酸信号转导有关，但并不抑制干扰素的产生”娜 关于P蛋白与病毒毒力的相关研究，主要集中于P基因缺失后，在稳定表达P蛋白的细胞系中获 上获得拯救的病毒，且能产生传代的病毒粒子，与控制组相比较，在2X103FFu的剂量下对其大鼠和 乳鼠颅内接种均无致病性，经CVS强毒株攻毒试验，结果表明该病毒具有良好的保护力和免疫原性， 可以作为潜在的弱毒疫苗株。 相似的研究表明：减少P蛋白的表达对于狂犬病毒毒力的减弱也是非常有效的手段之一。在狂犬 病毒N—P基因之间插入HIV—l的Gag蛋白，获得拯救的病毒，研究结果揭示：P蛋白的表达降低， 同时也降低了对鼠的致病力“”。 3狂犬病毒M蛋白 狂犬病毒基质蛋白(M)是一个多功能蛋白Ⅱ3‘1町。其功能机制如下(1)M蛋白通过调控病毒的 RNA聚合酶，进而调控病毒的转录和复制。但是调控倾向于复制。在狂犬病病毒转录与复制的模式中， 24 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 物，如果数量足够多，则阻止识别Leader／N之间的转录识别点，病毒开始复制，反之则进行转录。在 此病毒进行的复制和转录过程中，M蛋白则起着关键的作用；(2)M蛋白在病毒的装配和出芽过程中 扮演重要的角色。M蛋白负责将RNPs蛋白与细胞膜相连，同时它们紧密螺旋形成一个骨架样的结构， 最终与G蛋白一起出芽，形成病毒粒子。相关的研究还发现。M蛋自与G蛋白的关系非常密切，缺失 M蛋白的病毒粒子主要存在于细胞内，细胞液中感染性病毒粒子的产生比正常的病毒减少了50万倍， 同时M缺陷性的病毒，其病毒形状将变长，病毒成为棒状结构。 关于M蛋白与其病毒毒力相关的研究，与P蛋白一样，主要集中于M基因缺失后，在稳定表达 M蛋白的细胞系中获得的病毒粒子的研究。研究表明：狂犬病毒RC—HLAM株没有致病性，但可以在 的免疫效果，同时缺失M基因的RC．HLM病毒可以用来做为疫苗株，解决了普通弱毒疫苗株经免疫 动物后出现毒力反弹的现象““。 4狂犬病毒G蛋白 狂犬病毒跨膜糖蛋白(G)是诱导宿主产生中和抗体的主要蛋白，同时也是病毒主要的神经性致病 RC．HL株为背景的基础上获得拯救的病毒，研究病毒对大鼠的致病力。研究发现，原先弱毒的RC．HL 株毒力增强”-“J。进一步说明了糖蛋白对于病毒致病性的重要性。 B19 深人的研究还发现，成熟糖蛋白上不同位点氨基酸的改变，将影响病毒的生物学特性。SAD bs取代后，病毒的繁殖率，致病力增强，而被Ser取代后，则生物学特性与原毒株相似8”。因此，不 同的狂犬病毒株．糖蛋白(G)上特定基因与毒力的关系不具有普遍性，然而一些关键位点仍然是研究 的靶标。 对小鼠的致病性至关重要[22]o 经瘤细胞(NA)上的扩散。因此333位点一直是狂犬病毒毒力致弱的研究热点。体外定点突变狂犬病 毒弱毒HEP—Flttry株333位点的谷氨酸。使其替换为多数狂犬病强毒株相同位点所有的精氨酸，拯救 的病毒经过鼠脑内传代，发现弱毒的