烤烟叶片发育过程中类胡萝卜素类物质反相高效液相色谱法测定研究.pdfVIP

烤烟叶片发育过程中类胡萝卜素类物质的 反相高效液相色谱法测定研究 ， 韦风杰‘刘国顺’王芳1黄晓书2 (1国家烟草栽培生理生化研究基地，2-河南省高等学校农业生物技术与工程技术重点学科开放实验室河南郑 州450002) u 摘要：研究r反相高效液相色谱测定烤烟叶片发育过程中类胡萝h素类物质的方法。烤烟叶片中类胡萝h素用 禽0 3457％一0．372％。用该方法研究了烤烟发育过程中类胡萝h素变化捌律。 关键词：烤烟叶片类胡萝h素反相高效液相色谱法测定 类胡萝h素是存在于植物和微生物中的脂溶性色素，通常是指C40的碳氢化合物(胡萝h素) 和它们的氧化衍生物(叶黄素)两大类色素的总称。类胡萝h素在植物叶绿体光合作刚中起着重要 作州，它们是光合作耀中光传导途径和光反应中心的重要结构成分，担当叶绿体光雨l天线的辅助色 素，帮助叶绿体吸收光能；另一方面，它们在高温、强光下能通过叶黄素循环，以非辐射的方式耗 在烟叶中，类胡萝h素作为许多重要致香成分的前提物对烟草香味品质的形成有重要作用91。烟草 品质形成是烟草在品种、生态环境等综合条件下发育的结果。研究烟草发育过程中的类胡萝h素变 化具有重要意义【6】。类胡萝h素的测定常用分光光度法和液相色谱法m1。光度法准确性较差，传统 液相色谱法样品前处理复杂，周相萃取法虽简化前处理，但成本较高【9。…。我们研究了反相高效液 相色谱法测定烟草发育过程中叶片类胡萝h素类物质，采取简化样品前处理的方法，取得了较满意 结果。 1试验部分 1．1仪器与试剂 3k18型低温离心机。常州国华HY一4型振荡器。 站，Rheodyne7725i型手动进样阀。sigma 超纯水为石英亚沸蒸馏水并用北京历元公司超纯水仪处理，电阻≥18M Q；甲醇为Sigma公司 生产的色谱纯试剂，异丙醇为J．T．Baker公司生产的色谱纯试剂；叶黄质、紫黄质、新黄质植物色素 公司。 1．2色谱条件 i．d．X It 150mm，5 色谱柱为SymhaetryCl8反相色谱柱(3．9mmm)(美国Waters公司)。流动相为： u 波K=：450nm。进样量：10 1。柱温：室温。 1．3样品处理 取新鲜中部烟叶(供试品种：K326；盆栽试验；试验地点：河南农业大学科教示范园区国家烟 草栽培生理生化基地试验网室内)，擦净组织表面污物，剪碎(去掉中脉)，混匀。称取剪碎的新鲜 烟叶样品59，放入研钵中，加少量石英砂和5ml 90％丙酮(内含0．1％BHT)研成匀浆，再加丙酮 冲洗研钵后倒入三角瓶中，摇床振荡萃取30min，过滤，滤渣再用lOml 90％丙酮(内含0．1％BHT) 洗涤2～3次，至滤渣为白色，合并滤液，定容至lOOml，取其中6ml到离心管，加入0．19醋酸铅 m针头过滤器过滤。 10000转／分40d低温离心5分钟，用0．45u 2结果与讨论 2．1类胡萝b素的色谱分离 根据相关研究结果，我们选取甲醇；异丙醇=1：1为流动相，并试验了不同淋洗梯度条件。合理 (100％A)：I 的梯度条件，平衡10mjn后手动进样。该条件下主要类胡萝h素都能达到基线分离，分析时间较短 (图1、幽2)。 口口 图1烟草样品中类胡萝b素色谱图 口口 图2类胡萝h索标样色谱图 2．2标准工作曲线的绘制