CCK-8调节脂多糖诱导ECV-304NF-κB表达受体机制研究.pdfVIP

_ 中文摘要 NF．KB CCK．8调节脂多糖诱导ECV-304 表达的受体机制研究 摘 要 O％～80％。 休克是一种常见的危重病理过程，死亡率可达5 血管功能紊乱、循环阻力降低及体循环血压进行性降低是内 毒素休克的特征性病理变化之一。业已公认，血管内皮细胞 (vascularendothelial cell，VEC)不仅是机体血管的重要生 物屏障，而且还具有内分泌功能。在生理条件下，VEC的 内皮型一氧化氮合酶(eNOS)产生适量一氧化氮(NO)参 与调节血管紧张度和器官血流量的分布；在内毒素休克发病 过程中，VEC的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达明显上 调、活性增高并产生大量的NO，导致VEC的激活和功能 障碍，而VEC功能障碍在血管功能紊乱、循环衰竭的发生 中至关重要。iNOS的表达调控主要在基因水平进行，VEC B(nuclearfactor-K 核因子K B，NF．KB)在LPS诱生iNOS B激活后能与iNOS基因启动子 过程中起重要作用，NF—K 结合，调节iNOS的转录和表达。因此，若能适度抑制VEC NF—K B的活性，有助于减轻由iNOS诱生NO所导致的VEC 损伤，改善内毒素休克血管功能紊乱。 八肽胆囊收缩素(cholecystokinin 具有明确的抗休克作用。研究表明，CCK一8可使内毒素休 克和失血性休克大鼠的平均动脉压(MAP)回升，提高其 生存率；在离体条件下CCK．8可明显减轻LPS诱导的VEC 中文摘要 结构损伤，改善内皮依赖性舒张反应，而提高血管收缩反应； CCK_8可显著抑制LPS诱导的NF．KB活性；CCK受体 (cholecystokininreceptor，CCK—R)主要有两种亚型即： 介导。然而，有关CCK一8的抗内毒素休克作用的机制尚未 完全阐明，迄今为止，VEC是否存在CCK—R以及CCK．8 NF—K 对VEC B的表达有无影响尚未见报道。本实验以人 脐静脉内皮细胞株ECV-304为研究对象，观察CCK—AR及 CCK—BR 04 对LPS诱导ECV-3NF一1(B蛋白表达影响的受体机制。 04，传代至对 方法：培养人脐静脉内皮细胞株ECV-3 07细胞，加入无血清 数生长期，调整细胞密度为每瓶1×1 I心MI一1 640培养液及不同处理因素检测下列指标。 ImPCR检测CCK—AR及CCK—BRmRNA表达。实验 分为对照组、LPS量效组及LPS时效组。细胞分别用与实 LPS 验组等体积无血清RPMI一1640培养液，O．01～10mg／L 2h。用 LPS分别作用O．5h，2h，6h和1 作用2h或1mg／L RT-PCR方法检测ECV-3 果进行半定量分析。 免疫细胞化学方法检测M．1(B p65蛋白表达。先将细 胞从培养瓶消化成细胞悬液并移至六孔板内静置24h。实验 分组如下：①对照组：加入与实验组等体积无血清 RPMI．1 640培养液；②LPS组：细胞培养液中加入1