人工体神经—内脏神经反射弧盆神经节内突触重建形态学研究.pdfVIP

第四届全国解剖与临床学术研讨会暨‘解剖与临床)杂志创刊IO周年庆祝会论文汇编 人工体神经一内脏神经反射弧盆神经节内 突触重建的形态学研究 刘宇1高晓群’陈朝晖2肖传国2 l郑州大学医学院解剖教研室 郑州4500522华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科 【摘要】目的：观察建立人：￡体神经一内脏神经反射弧后脊髓前角运动神经与盆神经节：l了后 神经元突触连接的再生。方法：建立人工体神经一内脏神经反射弧人鼠模型(将大鼠左侧L4 脊神经前根近心端与L6脊神经前根远心端连接，同时将左侧L5、Sl脊神经前根在出椎间孔 处均切断lcm，并且用电刀烧灼中枢端)，设置对照组(将火鼠左侧L5、L6、S1脊神经前根在 出椎间孔处切断lcm，并且刚电刀烧灼中枢端)与止常对照组。模型鼠建立后六个月，在各组 大鼠L4脊髓。1，段运H{电泳给药法．丁．脊髓前角注入神经追踪剂四甲基罗丹明(T胍)，于左侧膀 胱壁肌层分三点川压力给约法注入神经追踪剂四甲基罗丹明(TMR)——(TMR用生理盐水稀释 至4％)；三日后生理盐水、4℃含有4％多聚甲醛的0．Olmol／1磷酸缓冲液依次灌注，然后取 左侧盆神经：仃后同定，浸糖过夜，一25℃恒冷箱切片机迮续切片，行尼氏染色以确定部位， 余各两张分别行FITc标记的免疫荧光组织化学染色；然后用激光共聚焦显微镜观察。结果： 显示为橙红色的条索状再生神经纤维，橙红色的：1了后神经元。免疫荧光组化：染成绿色的斑 点状突触蛋白。橙红色再生神经纤维与橙红色：铆舌神经元相接，并且橙红色神经元周围有绿 色突触蛋白萦绕，还可见到两者之间的复合色。结论：(1)免疫荧光组织化学方法结合顺行、 逆行神经追踪是研究人’r体神经一内脏神经反射弧切实可靠的方法。(2)人工体神经一内脏 神经反射弧的体神经纤维能够和盆神经节建立突触连接。 【关键词】人：I：体神经一内脏神经反射弧；突触；再生；神经示踪 自1990年人jI：体神经一内脏神经反射弧提出．这十儿年米已经有人量的ll台i床与基础研究证实了 该种新型术式的科学性、有效性与实州性。体神经长入内脏神经并且能够支配膀胱平滑肌控制排尿，这 在功能上已经得到了证实，但是新生的体神经与其新支配的靶器官产生怎样的联系，这方面的研究还是 有所欠缺。所以我们采用顺、逆行神经追踪结合免疫荧光组织化学的方法对人：』：体神经一内脏神经反射 弧建立后的人鼠进行研究，以了解大鼠在术后新生的神经与新的靶器官是否能够形成新的突触。 l材料与方法 1．1动物的分组与模型的建立 备皮，取背部止中切口。0．5％活力碘消毒手术区，依次切开皮肤、皮下筋膜，钝性向两侧分离竖脊肌， 暴露并咬除L5--,S1棘突和椎极，打开硬脊膜，分离出L5前根和S1前根，于椎间孔处分别将其切断约 缝合硬脊膜，逐层缝合切口。模型组，对照组和正常对照组均置于温暖(20--．，24℃)，湿度50％～60％， 249 第四届全国解剖与临床学术研讨会暨‘解剖与临床杂志创刊lO周年庆祝会论文汇编 光暗周期为12h的安静环境中饲养。模型组存活20只。 1．2神经示踪剂的注射 8个月后，两组大鼠均分两次给药，10％水合氯醛腹腔内注射麻醉，之后(1)大鼠膀胱平滑肌内注 射TMR：仰卧位固定于手术台，0．5％活力碘消毒腹部手术区。下腹部正中切口，找到膀胱，用连接有微 量注射器推进装置的玻璃微电极(尖端直径lO～15um)吸取4％TMR0．1ul，在左侧膀胱平滑肌内分上、 中、下三点三次进针，缓慢注入TMR，时间约为20min，注射完毕后留针约10分钟，石蜡油封闭进针部 位，生理盐水冲洗腹腔，依次缝合切口。(2)各组大鼠脊髓L4节段的前角区注射TMR：将前边大鼠转 换体位为附卧位固定于手术台。O．5％活力碘消毒背部手术区。背部正中切口，依次切开皮肤、皮下筋膜， 钝性分离两侧竖脊肌。用咬骨钳咬除T13～L1的棘突和椎板，显露硬脊膜，将大鼠同定于立体定位仪上。 立体定位仪上固定玻璃微电极，手术显微镜下进行穿刺L4脊髓前角，深约0．5cm。利用微电泳技术将 4％TMR-DA 泳时间为20min，完毕后依次缝合切口。 1．3取材与制备 安静