大珠母贝微卫星DNA标记的分离与筛选.pdfVIP

大珠母贝微卫星DNA 标记的分离与筛选 1, 2 1 1 柳 明 , 喻达辉 , 黄桂菊 (1. 农业部海水养殖生态与质量控制重点开放实验室, 中国水产科学研究院 南海水产研究所, 广东 广州 510300; 2. 上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306) 摘要: 采用生物素标记的(CA)15 探针和磁珠富集法构建了大珠母贝(Pinctada maxima)微卫星DNA 文库, 随机挑选1200 个菌落,经PCR 筛选得到298 个候选克隆,成功测序246 个, 分析获得251 个微卫星序列, 其中完美型、非完美型和混合型分别占 63% 、32%和 5% 。除探针中使用的CA 重复外, 还得到 AT 、 GT 、TC 、AG 、GC 、TAA 、CAA 、AGG 、GATA 、GACA 、GTGC 、CGTC 、GACG 、CTGT 等重复序 列。设计引物 90 对, 挑选其中 30 对合成并筛选出 21 对能在大珠母贝基因组有效扩增的引物。种群 PCR 扩增后利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行检测, 获得了 10 个多态位点, 共检测出 59 个等位基 因, 片段长度范围为 133~444 bp。各位点等位基因数2~8 个, 平均等位基因数 5.9 个; 有效等位基因数为 1.342 3~6.000 0, 平均为4.124 0; 多态性信息含量(C )为0.222 5~0.811 8, 平均0.7179; 期望杂合度(H )为 PI e 0.259 3~0.847 5, 平均0.717 9; 观测杂合度(Ho)为0.300 0~0.800 0, 平均0.533 3。这些微卫星多态性标记的 获得, 为进一步开展大珠母贝遗传育种、保护生物学和种群遗传多样性等研究奠定了一定基础。 关键词: 大珠母贝(Pinctada maxima); 磁珠富集法; 微卫星; 遗传多样性 中图分类号: S917.4 文献标识码: A 文章编号: 1000-3096(2010)08-0001-05 大珠母贝(Pinctada maxima), 俗称白蝶贝, 属于 满足应用的需要, 因此必须开发大量的微卫星标记。 软体动物门双壳纲异柱目珍珠贝科珠母贝属 本实验采用生物素-磁珠富集法和探针杂交相结 (Pinctada) 。主要分布于热带海域, 如澳大利亚、菲 合的方法, 构建了大珠母贝的微卫星富集文库, 筛 律宾、马来西亚、印度尼西亚等地[1] 。大珠母贝经济 选大珠母贝的微卫星标记, 为大珠母贝的遗传育种、 价值很高, 其肉(闭壳肌)质味道鲜美、营养丰富, 堪 保护生物学和种群遗传多样性等研究奠定基础。 称为宴席佳品。它的壳形独特, 珍珠层厚而有美丽光 1 材料与方法 泽, 是名贵的工艺原料。用大珠母贝养殖出来的珍珠 颗粒大, 色泽好, 价格高, 既是贵重的装饰品, 又是 1.1 材料来源 名贵药材。我国的大珠母贝资源本来就很少, 属于国 用于微卫星分离的大珠母贝样品于2008 年8 月 家二级保护动物, 过度利用使其更处于濒危状态, 采集于海南三亚, 用于微卫星多态引物筛选的大珠 因此不能直接用野生大珠母贝进行育珠生产而必须 母贝 30 个样品个体于 2007 年 7 月采集于海南三亚 使用人工繁殖个体。人工养殖贝育成的珍珠一致性 养殖群体, 取闭