蛋白相互作用技术新进展.docVIP

源自瑞典的免疫荧光检测试剂，专利的PLA技术，创新的DNA滚环复制RCA放大信号，得到极高灵敏度的检测；美国ABI公司和昂飞（Affymetrix）公司都已经购买的专利PLA技术；全球顶级生物杂志Nature、Cell的上千篇文献都在使用的Olink，助力您的科研！ 每一个斑点都与众不同 原位定量检测蛋白相互作用； 对比分析正常、处理过的、病变的细胞和组织； 得到清晰、高分辨率的图像； 标准的数据分析处理； 原位客观准确的定量检测蛋白分子 Duolink采用PLA专业技术，通过一抗、二抗、RCA滚环复制来放大荧光信号。由于Duolink采用了PLA专利技术，得到很高的分辨率和特异性，可以更清晰的、定量的研究蛋白-蛋白相互作用、蛋白的磷酸化水平、蛋白的定量等。 在固定的细胞、组织，原位分析，数据分析标准化，可以方便的对正常、刺激后或病变的组织、细胞进行分析比较。 Duolink采用PLA原理，应用领域有： 原位研究蛋白-蛋白相互作用； 免疫组化、免疫荧光检测、Western Blot、免疫共沉淀等的替代技术，更高的特异性和灵敏度； 高特异性的研究蛋白翻译后的修饰（例如磷酸化修饰）； 研究刺激、抑制后的蛋白表达水平变化； 作为高内涵药物分析平台（HCS）的荧光试剂； 研发基于PLA技术上的蛋白标记分析； 固定的样品，冰冻切片或石蜡切片等，在载玻片上做实验； 加入一抗、二抗和显色剂，在显微镜下观察到一个个的红色斑点，免费的软件可以定量的分析； 克服原来的方法的局限 原位定量检测蛋白-蛋白相互作用； -采用两种不同的一抗，来研究蛋白-蛋白相互作用。 更高的特异性和灵敏度； -采用两种不同的抗体，增加特异性， -通过滚环复制RCA，放大荧光信号，增加反应的灵敏度。 保证亚细胞水平的定位； -不需要裂解细胞，直接用固定的细胞。 研究正常生理表达水平，天然状态下的分子相互作用； -不需要过量表达待测蛋白，保持正常的生理状态。 原位研究细胞或组织，适合于样品非常稀少或珍贵的实验； -不需要培养制备大量的细胞，滚环复制RCA信号放大保证了极高的灵敏度。 适合于检测弱的相互作用 -和免疫共沉淀相比，固定细胞或组织前，不用清洗。 标准化的数据分析 Duolink可以生成单个的荧光斑点，每一个荧光斑点代表了一个蛋白分子或一个蛋白-蛋白相互作用事件。所以原来的方法（免疫共沉淀，荧光共振能量转移等）多是定性的、半定量的。而Duolink却可以定量的显示、分析和存储数据。（免费的软件来自动分析图像。） 优势很明显 下面的图标，显示了Duolink的强大优势。原位的免疫荧光方法，研究蛋白表达、蛋白-蛋白的相互作用，由于高的背景噪音和低的灵敏度，使得有很多局限。Duolink提供了高清晰度、定量的、可视化的数据。下面图示的例子，是研究信号转导EGFR受体的表达。 三个图： 图1、免费的数据分析软件，自动计数每个细胞内斑点的个数，可以定量的统计研究； 图2、Duolink原位PLA计数，单个的斑点个数代表受体蛋白表达的高低。（一抗是小鼠制备的，抗EGFR受体蛋白的；Duolink二抗末端是PLA寡聚核苷酸单链，是抗小鼠的。） 图3、传统的免疫荧光，由于信号不灵敏，背景噪音很强，所以在蛋白-蛋白相互作用研究、单个蛋白检测方面，不是很理想。 （一抗是小鼠制备的，抗EGFR受体蛋白；二抗是抗小鼠的，Texas Red标记的。） 免疫荧光 Duolink 图4、信号/背景噪音比值，上图免疫荧光背景噪音信号很强，而Duolink的背景信号很低。所以可以得到很高的灵敏度。 Duolink原位PLA技术 高灵敏度，检测蛋白相互作用。 图一：未处理的细胞，对照组，没有TGF-β刺激。细胞核用Hoechst 33342（蓝色）染色；微丝骨架用FITC，抗微丝抗体染色（绿色）； 图二：每一个红色斑点，等于每一个相互作用。刺激的细胞：每一个红色斑点，表示一个相互作用。（SMAD1/2/3和SMAD4蛋白） SMAD蛋白复合物的亚细胞定位 SMAD复合物，由SMAD1/2/3和SMAD4蛋白相互作用形成。SMAD复合物，是TGF-β信号通路的信号强弱的指示物。这个例子，显示了使用Duolink可以得到清晰的图片和准确的数据。显示了小鼠胚胎成纤维母细胞的亚细胞水平上，SMAD复合物的形成。 数据是和瑞典Uppsala大学的K.pardali教授合作完成的。 高特异性 举例，高特异性定量检测蛋白的磷酸化水平。 图一、未处理的细胞，没有刺激，结果是没有任何红色的斑点信号（背景信号几乎为0，所以可以得到极高的灵敏度和极低的背景信号）。细胞核用Hoechst