RNA干扰技术新进展.pdfVIP

中国医药生物技术 2009 年 10 月第 4 卷第 5 期 Chin Med Biotechnol, October 2009, Vol. 4, No. 5 377 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2009.05.013 ·综述· RNA 干扰技术新进展 王世瑶，刘燕鹰，穆荣，栗占国 20 世纪 90 年代初，科学家在矮牵牛花中导入与花青 完全模拟体内天然形成的 siRNA ，可直接进入 RISC 中发 素合成有关的查尔酮合成酶基因，原以为转基因的牵牛花会 挥功能[3-4] ，所以在临床应用方面受到更多的关注。 变得更鲜艳，结果却发现一些花反而变成白色，这种现象引 起人们的高度关注，之后的研究将这种过度表达内源基因而 3 siRNA 的修饰 引发的基因沉默称为共阻遏。在这一背景下，Fire 等[1]在进 siRNA 相对分子质量较小，所以在体内不稳定，其在 行线虫基因沉默研究中，发现并将这种双链 RNA （dsRNA ） 血浆内的 t1/2 为 5 ~ 60 min ，容易经肾脏清除或被内源性的 抑制基因表达的现象称为 RNA 干扰（RNAi ），他们也因此 RNA 酶降解。因此研究者通常将 siRNA 与其他分子或颗 获得了 2006 年诺贝尔生理学或医学奖。现如今 RNAi ，尤 粒融合在一起即进行 siRNA 修饰，通过修饰既可延长 其是引发 RNAi 现象的小片段 RNA 双链分子即小干扰 siRNA 在血浆中的 t1/2，又可帮助 siRNA 顺利通过细胞膜。 RNA （siRNA ），已经毫无疑问地成为生物学基础研究的重 化学修饰的 siRNA 多采用亲脂性化学基团或融合蛋白等 要工具，并且通过它几乎可以修正和调控所有人类致病基 进行修饰，具有可提高 siRNA 的稳定性和活性、能抵抗核 因，为药物的开发提供了前所未有的机遇。 酸酶降解作用、利于被细胞摄取、不具有病毒载体潜在的风 尽管 siRNA 在体外可以有效地抑制目的基因的表达， 险性等优点。但很多体内实验也表明，修饰后的 siRNA 分 但是在体内 siRNA 若要发挥作用，在很大程度上取决于其 子体内 t1/2 延长，同时基因沉默效率也会受到影响[5-7] ，因 药代动力学、在血清中的稳定性和细胞摄取等方面。因此， 此有药物疗效的是未经修饰的 siRNA ，而不是 t1/2 最佳的 RNAi 在应用过程中要考虑到分子的设计、合成方式以及导 siRNA，所以在选择 siRNA 修饰方式时要权衡 t1/2 和沉默 入途径等很多方面。现本文就 RNAi 技术应用方式的选择 效率两个方面的因素，根据自身研究目的，选择适合的 及其存在的问题进行综述。 siRNA 修饰非常重要。 在各种化学修饰中，硫代磷酸酯应用最为广泛，但其对 1 siRNA 的设计 人体的毒副作用也限制了它的发展。由于化学修饰具有 为了达到最大限度的基因沉默效果和减少其非特异性 siRNA 传统载体（如病毒等）不可比拟的优势，因此研究 的产生，siRNA 分子序列的设计优劣至关重要。其中包括 者们对修饰的方法也在不断地改进，如利用硼烷化磷酸盐代 目的碱基序列、双链末端的稳定性以及 siRNA 同 RNA 诱 替硫代磷酸酯以及 2 ，4-二硝基苯酚修饰 siRNA 等等，技 导沉默复合体（RISC ）的结合等等。设计合理的 siRNA 序 术的不断改进与创新，也为 siRNA 的应用奠定了基础。 列能够提高基因沉默的效率，它通常长度为 21 ~ 22 nt ，GC 含量 30% ~ 50% ，3’ 末端凸出 2 个碱基通常为 dTdT 或 4 siRNA 的跨膜转