SDS_PAGE法测定His_tag融合蛋白分子量产生偏差的原因_唐威华.pdfVIP

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2017-08-20 发布于重庆
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SDS_PAGE法测定His_tag融合蛋白分子量产生偏差的原因_唐威华.pdf

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SDS_PAGE法测定His_tag融合蛋白分子量产生偏差的原因_唐威华.pdf

64 植物生理学报, Acta Phy top hysiologica Sinica 　2000, 26(1):64～68 SDSHis-tag 唐威华　张景六　王宗阳　洪孟民 (, 200032) :His-tag/Ni-NTA 系统是新发展起来的一个亲和 ,, 纯化重组蛋白的有用工具, 现常用于基因编码产的 , 特性研究中。SDS是实验室测定蛋白质分子量 , 通常采用的方法, 而许多实验室用此方法检测His-tag (Sambrook 1989)。SDS 融合蛋白时却常发现测得的分子量偏大, 产生偏差的 , 原因尚未阐明。为弄清这一问题, 本实验室在研究一 His-tag 个His-tag 融合蛋白 P73-His 时, 首先用SDS法测得其分子量确实比理论计算值大, 然后对其进行 C 末 , 端氨基酸顺序测定、电喷雾质谱分析, 结果证实其实际。His-tag SDS- 分子量与理论值一致。酶切去除包括His-tag 在内的 PAGE 部分肽段使SDS法测量蛋白分子量的偏差大大 (Harwood 1994), 降低, 证实His-tag 确实是造成偏差的原因之一。推测 (Niu Guiltinan 1994), 由于His-tag 中的碱性氨基酸的作用造成蛋白在 SDS- (Kim Chung 1997, DeMaria Brewer PAGE 中迁移变慢, 而导致偏差。这一现象值得引起 1996), 有关研究者的注意。 , 。 His-tag/Ni-NTA :His-tag/Ni-NTA, 融合蛋白, SDS, 电喷雾质谱,分子量 , :Q74 。 cDNA c73 　　,, His-tag , , Ni-NTA , 。 SDS (Hockney 1994)。 , , 3 。 , C , , , 。His-tag/Ni- 。 NTA , His-tag/Ni-NTA His-tag 6 (His-tag) , , , His-tag Ni , SDS。 Ni-NTA (Hochuli His-tag SDS, 1987)。His-tag , His-tag 。 , , 1　。 , 1.1　。 1.1.1　　Mini-protein (Bio-Rad), - PE-ABI 491 Procise C , (SDS)。 SDS、 1999-02-10 ,