_连环素融合绿色荧光蛋白真核表达质粒的构建及表达.pdfVIP

第 27卷第 2 期 同 济 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) Vol. 27 No. 2 2006年 4 月 JOURNAL OF TON GJ IUN IV ER SITY (M ED ICAL SC IENCE) 　Ap r. , 2006 　　文章编号 : 1008 - 0392 (2006) 02 - 0070 - 04 β 连环素融合绿色荧光蛋白真核表达 质粒的构建及表达 1 2 2 张爱红 , 徐雅飞 , 王建枝 ( 1. 同济大学高等技术学院医学技术与护理系 ,上海 　200070; 2. 华中科技大学同济医学院病理与病理生理系 ,武汉 　430030) β β 摘要 : 目的　构建 连环素融合绿色荧光蛋白真核表达质粒 ,为进一步研究 caten in在神经细胞内与其它蛋白 质如 tau、PS1的相互作用以及在阿尔茨海默病发病机制中的作用提供一种有用的工具 。方法 　用亚克隆的方法将 β 连环素基因插入到真核表达载体 p EGFPC1,重组质粒 p EGFPcat瞬时转染野生型鼠成神经瘤细胞株 ,并在荧光 β 倒置显微镜下观察转染效率 。结果 　酶切鉴定和测序结果证实编码 caten in 的重组质粒构建成功 ,免疫荧光技术 β β 和免疫印记结果显示 caten inGFP融合蛋白在真核细胞中获得表达 。结论 　成功构建 连环素融合绿色荧光蛋 β 白真核表达质粒 ,并在鼠成神经瘤细胞中表达了 caten inGFP融合蛋白。 β 关键词 : caten in基因; 绿色荧光蛋白; 成神经瘤细胞 ; 融合蛋白 中图分类号 : Q 786　　　　　　文献标识码 : A β (β ) 　　 连环素 caten in 最初被鉴定为一种与黏附 从 CLON TECH 公司购买 , Cfr9 I从 MB I公司购买 , 分子 cadherin 结合的胞浆蛋白,联结 cadherin 与骨 EcoR I、Sp e I、B amH I、B glII、Xho I 限制性 内切酶 、T4 [ 1 ] β 架蛋白 actin 。后来发现 caten in 是 W n t信号途 DNA 连接酶从 Tanaka 公司购买 。氨苄青霉素 、卡 径的重要信息分子 , 参与调控生长发育和肿瘤发 那霉素均为 Sigm a 公司产品。1 kb DNA L adder、预 生 [ 2 - 3 ] 。越来越多的证据标明 , W n t信号途径异常 染的高分子量标准 、DM EM 、OPT IM EM 、胎牛血清 ( ) ( FB S) 从 Gib ico 公 司购 买 。转 染 试 剂 盒 L ipo 在阿尔茨海默