一种高效构建同源重组DNA片段的方法融合PCR.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（８）：５３～５８ 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 殏檪檪 技术与方法殏檪 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 一种高效构建同源重组ＤＮＡ片段的方法 ———融合ＰＣＲ 李　敏　杨　谦 （哈尔滨工业大学生命科学与工程系　哈尔滨　１５０００１） 摘要　融合ＰＣＲ技术（ｆｕｓｉｏｎＰＣＲ）采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的ＰＣＲ产物，通过 ＰＣＲ产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意ＤＮＡ片段连接起来，此技术在不需要内切酶消 化和连接酶处理的条件下实现ＤＮＡ片段的体外连接，为同源重组片段的构建提供了快速简捷的 途径。对原有的融合ＰＣＲ技术进行改进，以３个同源重组线性ＤＮＡ片段的构建为例，详细论述 了改进的融合ＰＣＲ技术的反应过程及技术体系。结果表明，改进的融合ＰＣＲ技术可以同时进行 ３个片段及４个片段的融合反应，产物长度均在４．５ｋｂ以上，各同源重组片段在扩增过程中均无 突变发生，获