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RNA干扰抑制Fas基因的研究进展 1 2 3 李玺 ，张俊峰 ，审校：陈规划 1 博士生 中山大学附属第三医院肝移植中心, （510630 ）dr-lixi@21 2 博士 中山大学附属第三医院肝移植中心, （510630 ） 3 教授 中山大学附属第三医院肝移植中心, （510630 ） RNA干拢(RNA interference , RNAi)是指与目的基因序列互补的内源性或外源性双链小干扰 双链RNA (small interfering double strand RNA siRNA)介导的转录后基因沉默机制 (posttranscrip tional gene silencing ,PTGS)，虽然基因的转录正常，但mRNA发生特异 性降解,导致靶基因沉默,产生相应的功能表型缺失。Fas/FasL系统被认为是机体免疫系统诱 导细胞凋亡的主要途径，表达FasL的T淋巴细胞与表达Fas的靶细胞结合可诱导其凋亡， Fas/FasL系统参与了多种疾病的发生与发展。近年来，利用RNAi沉默Fas基因在防治免疫相 关性肝炎等方面的研究显未了可喜的前景。 关键词：RNA干扰 Fas基因 1. RNAi 的发现 1990年Napoli等[1]发现进入细胞的转基因在拷贝增加时其表达水平反而下降，同时内源性 的同种基因也能被转基因抑制。尽管这种基因沉默可发生于转录阶段，但现在认为大多数的基 因抑制机制发生在转录后，而转录后基因沉默(PTGS)的一个主要机制就是siRNA靶向选择性地 降解mRNA, 即RNAi[2] 。Fire 等[3] 在实验中发现在秀丽新小杆线虫中仅需注射少量双链 RNA(dsRNA)就可以抑制与dsRNA 同源基因的表达,而所需dsRNA 的量比达到同样抑制效果所 需的单链反义RNA低若干数量级。而且针对mRNA 的抑制作用可持续多个细胞周期[4] 。RNAi 是一种高度进化得以保存的机制, 出现在多种真核细胞[5] 。在哺乳动物中,较长的dsRNA 因能诱 导IFN (干扰素) 生成,mRNA 能够发生非特异性降解,不存在特异性的RNAi[6] 。但在2001 年, Tuschi 等报道在哺乳动物中也存在RNAi 现象,介导RNAi 的中间物质是双链小RNA ( small interfering RNA , siRNA) ,只要dsRNA短于30 bp,就不会促发干扰素效应,能够特异性的降解靶 mRNA,导致基因沉默。 2. RNAi 的作用机制 dsRNA引起的RNAi大致可分为3个阶段即启动、剪切、倍增。研究证实dsRNA在体内通过 21～23个核苷酸片段即小干扰RNA ( siRNA) 发挥其抑制作用。结构典型的siRNA具有5′端磷酸 基和3′端羟基、3′端外悬垂2个核苷、长21～23nt双链结构[7] 。双链siRNA与解旋酶、核酸酶分 子结合形成RNA诱导的沉默复合体(RNA–induced silencing complex ,RISC)与靶mRNA互补的 siRNA链作为起始物,通过RNA依赖的RNA聚合酶( RNA – dependent RNA polymerase ,RdRP) 使同源的mRNA形成dsRNA 。这一mRNA 的dsRNA形式之后作为Dicer酶剪切的底物,最终引发 mRNA 的降解,形成新的siRNAs[8, 9] 。这一过程有效地放大了RNAi反应,并产生能使自身永久存 在,形成降解PCR(degradative polymerase chain reaction) 循环,一直持续到靶mRNAs完全降解。 RNAi具有高度的序列特异性和高效性[10] 。 3. Fas系统与细胞凋亡 Trauth等[11]发现了可以诱导活化或恶性变淋巴细胞凋亡的单克