肾移植受者红细胞ITPA活性和硫唑嘌呤不良反应关系的研究.pdfVIP

撼2008 蚴第The十t1协一N次atio金nal烹慧彦薰熏是京堂瓣 肾移植受者红细胞ITPA活性与硫唑嘌呤 不良反应关系的研究 辛华雯 熊晖 吴笑春李罄 熊磊余爱荣 1．广州军区武汉总医院临床药理科湖北武汉，430070 临床上硫嘌呤类药物应用广泛，但此类药物的 不良反应发生率较高。硫嘌呤类药物的不良反应包 色谱纯，三乙胺等其余试剂为分析纯，蒸馏水经重蒸 括骨髓抑制、肝脏损害、胃肠紊乱、胰腺炎和流行感 馏处理。 冒样症状等。目前国内外已有研究证实硫嘌呤类药 2．方法学样本选择 S- 选择健康成年人作为方法学试验的受试者，男 物所致骨髓抑制与硫嘌呤甲基转移酶(thiopurine methyhransferase，TPMT)基因多态性密切相关，近年女不限。受试者在3个月内均无输血史，肝肾功能 来研究发现三磷酸肌苷焦磷酸酶(inosinetriphos-正常，采血前一周未服用任何药物。 3．血液样品的处理 phatepyrophosphatase，ITPA)缺陷的患者也会发生 一系列不良反应。嘌呤类药物在体内的代谢产物可 采集外周静脉血2ml置EDTA抗凝管中，3000 参与三磷酸肌苷(inosine r·min叫离心10min，弃掉血浆，剩余沉淀加入2倍 triphosphate，ITP)的合成， 体积的0．9％氯化钠溶液混匀后3000r·min“离心 nPA催化水解ITP为单磷酸肌苷以及6-巯基衍生 10 物从而使嘌呤类药物得到回收利用。另外，在正常 min。弃掉上清液，将所得红细胞200trl分装于 EP管中，一40℃储存。 细胞中，ITP由IMP磷酸化产生，ITPA则负责将ITP 转化为IMP，以保证ITP不在正常细胞中累积。若 4．样品孵育和处理 ITPA缺陷，则IrI’P无法水解，可能导致毒性6-巯基一从冰箱中取出预先制备的红细胞200斗l，解冻 ITP的过度蓄积，从而引发胃肠紊乱、胰腺炎和流行 后加入4倍体积的冰蒸馏水混匀，制备成溶胞产物。 感冒样症状等一系列非剂量依赖性不良反应…。 将溶胞产物13000r·min“离心10min，取上清液 因此测定ITPA的活性对于合理应用嘌呤类药物十 mmol· mmol·L～；Tris：100 分重要。 mmol·L～；Mscl，：l ITPA存在于人体的多种组织中，如肝、肾、红细 mmol· 胞和白细胞等，而红细胞是测定ITPA活性最容易37℃水浴中预孵育5min后加入nP(40 得到的组织。本文建立了一种操作简便、灵敏特异 L。1)lo斗l，37℃水浴中孵育1h。加入25斗l高氯酸 的ITPA活性测定方法，并且通过测定llo例曾经服终止反应，涡旋混匀，再加入35山饱和K：HPO。溶 r·rain“ 用或正在服用硫唑嘌呤(azathioprine，AzA)的肾移液中和过量的高氯酸。涡旋混匀后13000