双歧杆菌抑制轮状病毒感染肠上皮细胞IL-8、TNF-α分泌研究.pdfVIP

第六届全国儿科微生态学学术会议暨儿科微生态学新进展学习班资料汇编 的细菌在初期更多的与 IECs 上的受体接触作用有关，同时也说明双歧杆菌促 IECs 分泌IL-8 水平 与其作用的时间和剂量关系不大。结肠内生存着大量的共生菌，IECs作为哨兵细胞不仅能区分敌 （病原菌）友（共生菌），而且也能把识别过程翻译为黏膜固有免疫应答信号，调节此平衡，在共 生微生物存在时，此平衡偏向于形成耐受；病原体存在时，则偏向于发生炎症应答以破坏病原体。 肠道内微生物依靠所含的病原相关分子模式与 IECs 上的模式识别受体的相互识别， Rakoff-Nahoum 等证实 TLRs 介导的 NF-κB 信号通路参与共生菌维持肠道组织稳定的作用，双歧 杆菌含有脂磷壁酸、肽聚糖、CpG DNA 等免疫活性成分，可以通过识别 IECs 表达的相关 Toll 样 受体等，影响 NF-κB 信号通路活化状态，调控不同状态下细胞因子的分泌水平。但双歧杆菌发挥 这些作用的具体机制以及这种影响不同状态下 IECs 的细胞因子分泌水平对肠道粘膜免疫系统发 生、成熟的具体作用还需要我们进一步深入研究。 9．双歧杆菌抑制轮状病毒感染肠上皮细胞IL-8、TNF- α分泌的研究 程茜 黄鸿眉（重庆医科大学儿童医院儿童保健科，400014） 轮状病毒（rotavirus,RV ）感染是引起儿童秋冬季腹泻的主要病因，其高发病率、严重程度和多 种并发症使其治疗受到广泛关注。小肠成熟绒毛上皮细胞是 RV 感染主要侵犯的靶细胞，同时也是 启动机体抗病毒应答和导致临床症状的效应细胞[1] 。双歧杆菌作为肠道最重要的益生菌之一，依靠 黏附于肠上皮细胞发挥其各种生理作用，双歧杆菌用于治疗 RV 感染引起的腹泻已广泛应用于临床， 并取得较好的疗效，然而其具体作用机制尚不清楚。本研究旨在通过体外应用双歧杆菌与 RV 感染 肠上皮细胞共培养，了解双歧杆菌对于 RV 感染肠上皮细胞 IL-8 、TNF-α分泌水平的影响。 1. 材料和方法 1.1 双歧杆菌培养 两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum ）标准菌株Bif1101 由重庆医科大学临床 微生物教研室提供，中国科学院微生物所鉴定。将双歧杆菌接种至 BL 肉汤培养基，37℃厌氧培养 48 小时后，离心洗涤后置于 65℃水浴，30min 灭活处理，RPMI1640 培养基重悬备用。 1.2 细胞培养 人结肠癌上皮细胞株 HT29 由本实验室保存，RPMI1640 培养基购自 GIBCO 公司，胎 牛血清购自HyClone 公司。HT29 用含 10%胎牛血清的RPMI1640 培养基（含100U/ml青霉素，100μg/ml 链霉素，0.25%谷氨酰胺），37℃，5%CO2 常规培养。光镜下观察细胞形态及细胞病变。 1.3 RV 感染 猴轮状病毒株 SA11 由兰州生物制品所惠赠，在MA104 细胞中增殖，收获病毒，保存 于-80℃。RV 在胰酶浓度为 10μg/ml 的无血清培养基中作用 30min 后，接种于长成单层的 HT29 细胞， 吸附 60min，去掉吸附液，加入胰酶浓度为 0.5μg/ml 的无血清RPMI1640 培养基继续培养。 1.4 ELISA 法检测 IL-8 、TNF-α表达水平 IL-8 、TNF-α细胞因子试剂盒购自晶美生物公司，实验组 9 分为正常细胞对照组、RV 感染组、高剂量双歧杆菌干预组（RV 感染后立即加入终浓度为 1×10 6 CFU/ml 的双歧杆菌共培养）、低剂量双歧杆菌干预组（RV 感染后立即加入终浓度为 1×10 CFU/ml 的双歧杆菌共培养），分别于感染后 6h、24h 收获各组细胞培养上清，离心后检测 IL-8 、TNF-α表达 水平，检测过程严格按照试剂盒说明书进行，每个样品均设复孔，取平均值。 1.5 统计学处理 数据均以 x±s 表示，采用 SPSS 11.0 软件进行统计处理。 2 结果 2.1 光镜下观察  感染后 6hRV 感染组