四君子汤复方总多糖对小鼠肠上皮间淋巴细胞(iIEL)作用研究.pdfVIP

四君子汤复方总多糖对小鼠肠上皮间淋巴细胞(iIEL)作用的研究 张大鹏1 1 2 2 张志敏 周联 王培训 (1广州医学院一附院中医科；2广州中医药大学免疫研究室) 摘要 目的 初步探讨四君子汤复方总多糖对小鼠肠上皮间淋巴细胞(iIEL)免疫功能的影响。 方法 采用机械分离法和非连续密度梯度离心法提取iIEL ；四君子汤复方总多糖与去蛋白多 糖连续灌胃7天，流式细胞（FCM ）技术检测iIEL 中CD3+ + 、CD69 细胞比例，ELISA法检测 iIEL上清液的IFN-γ和IL-2浓度。结果 iIEL 中CD3+细胞88.46% 以上；环磷酰胺可使iIEL 中 + CD69 细胞比例下降，iIEL上清液中IFN-γ和IL-2浓度降低，与正常组比较有统计学意义（P ＜0.01 ），而四君子汤多糖和去蛋白多糖均可明显提高组iIEL 中CD69+细胞比例，IFN-γ和IL-2 浓度也显著恢复与环磷酰胺组比较有统计学意义（P ＜0.05 ），多糖组和去蛋白多糖组在对 + CD69 细胞比例和IL-2和IFN-γ分泌水平的影响上差异均没有统计学意义。结论 四君子汤复 方总多糖可提高环磷酰胺抑制的iIEL 的CD69+细胞比例和IFN-γ和IL-2分泌水平，具有肠道黏 膜免疫调节作用。 关键词 四君子汤复方总多糖；小肠上皮间淋2 巴细胞（iIEL ）；CD3和CD69 ；IFN-γ和IL-2 四君子汤是《太平惠民和剂局方》中治疗脾胃气虚的基本方，具有益气健脾的功效， 现代研究表明该方对机体免疫系统具有多方面的药理作用，小肠上皮细胞内的淋巴细胞 （intestinal intraepithelial lymphocyte，iIEL ）具有分泌细胞因子等多种功能，是粘膜免疫系 统的第一道防线，在肠道免疫中起着重要作用。以往的研究[1-3]初步证明四君子汤总多糖可 改善机体低下的免疫状态，对环磷酰胺（CY ）造成的肠道粘膜免疫功能障碍也有明显的改 善作用，本实验通过观察四君子汤复方总多糖和去蛋白多糖对iIEL 的CD69+细胞比例及IFN-γ 和IL-2分泌水平的影响，试图阐明四君子汤复方总多糖可能通过对iIEL免疫功能的影响从而 发挥对肠道粘膜免疫功能的调节作用。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1 动物 NIH小鼠，（广东省医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK （粤）2003-0002 ， 粤监证字2007A004 ），雌雄各半，6～8周龄，体重18～22g 。 1.2 试剂 Percoll细胞分离液（比重：1.131g/ml），Pharmacia公司；四君子复方总多糖和去 853 [4] 蛋白多糖按常规方法制备 ，并用纯净水溶解；环磷酰胺（Cyclophosphamide，CY ），江苏 恒瑞医药股份有限公司，批；抗小鼠CD3e-PE-Cy5、CD69-PE，美国BD-PharMingen 公司；IFN-γ和IL-2 ELISA试剂盒（进口分装，批号：0711201、0711211 ）购自广州合达生 物科技有限公司；RPMI1640 ，Cat No.31800-002，美国GIBCO公司；胎牛血清（FCS ），Cat No.XQ001 ，杭州四季青有限公司；其他试剂均为分析纯试剂。 1.3 主要仪器 FACSCalibur流式细胞仪，美国Becton Dick-inson公司；多功能酶标仪，瑞士 TECAN公司；电子分析天平：德国Sartorius产品，d = 0.1mg ；UV-260紫外-可见光分光光度 计，日本岛津公司；台式冷冻高速离心机，美国Beckman CS-15R型；纯水仪，美国Millipore 公司Q-plus型。