分子生物学课后习题答案终结版.docVIP

第7章、基因操作 1.PCR过程中的DNA模板变性、模板与引物退火、引物延伸3步的温度设置一般大致是多少？要考虑的主要因素是什么？ DNA模板变性 (denature)： 95℃左右高温使模板DNA完全变性。 单链DNA模板与引物退火 (annealing)：55℃左右引物与模板形成复合物的几率DNA分子自身的复性。 引物的延伸 (extension)： 72℃左右耐热DNA聚合酶在最适温度下催化DNA合成反应。 2.衡量PCR好坏的参数主要有哪些？一般来说好的结果如何体现？ 特异性Specificity:最好只有目的DNA带。 真实性Fidelity:DNA序列正确。 产量Quantity:DNA带明亮。 3. 以TaqMan技术为例，简述实时荧光PCR的原理。 PCR扩增时，Taq酶的5’- 3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而使荧光监测系统可接收到荧光信号； 每扩增一条DNA链就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。 4. 用于核酸探针标记的32P ATP有几种， DNA切口平移标记法、随机引物标记法和5′末端标记分别应该用哪种？为什么？ 2种：r-32P ATP、a-32P ATP (1) DNA切口平移标记法：[α-32P]-dCTP (2) DNA随机引物标记法：[α-32P]-dCTP (3) DNA的5’末端标记法：[γ-32P]-ATP (4) DNA的3’末端标记法: [α-32P]-dCTP 32P的放射性较强，放射自显影所需时间较短，灵敏度极高；特异性极高；对各种酶促反应无任何影响,也不会影响碱基配对的特异性与稳定性和杂交性质。 5. 简述采用Biotin标记探针进行North-South杂交原理和操作流程。 ①DNA电泳,转膜，紫外交联固定 ②洗膜封闭 (地高辛标记) ③杂交：生物素标记的探针与靶DNA结合 ③杂交：Dig标记的探针与靶DNA结合 ④HRP标记的链亲和素与探针上的生物素结合 ④HRP/AP标记抗体与Dig结合 ⑤底物在HRP催化下,反应发光 ⑤底物与抗体-HRP/AP反应, 显色或发光 6.简述蛋白质印迹技术Western Blotting间接法操作流程。与直接法相比较，主要的差别是什么？ ①电泳分离,转膜,固定蛋白于膜上 ②漂洗和封闭 直接法操作流程: ③一抗与蛋白结合 (小鼠单抗或兔多抗) ③HRP/AP标记抗体与蛋白结合 ④HRP,AP标记二抗与一抗－蛋白复合物结合 ④底物与抗体-HRP/ AP反应, 显色或发光 ⑤底物与二抗-HRP, AP反应, 显色或发光 主要的差别： 1.免疫特异性不受标记影响 2.信号放大,灵敏度高（多个二抗结合位点） 3.多种标记的二抗可供选 4.可选择不同的Marker 7、Southern印迹杂交是将经凝胶分离的DNA转移到合适的固相支持物，再通过特异性探针的杂交来检测被转移的DNA片段的一种技术。程序：限制性内切酶消化DNA→琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段→转印到NC膜或尼龙膜→碱变性、中和→预杂交、杂交→放射性自显影.其基本原理毛细管转移 8、Northern印迹杂交程序: 将RNA样品变性和通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到NC膜等固相载体上，用标记的DNA或RNA特异探针对固定在膜上的RNA进行杂交。 两者基本原理;，变性方法不同点。 9.基因操作技术在医学方面的应用主要包括？ （1）基因分析——疾病相关基因和疾病分子机制的分析； （2）基因诊断——建立新的疾病诊断方法； （3）基因治疗——纠正人类基因缺陷的方法； （4）法医学鉴定——发展出新的法医学鉴定方法； （5）高效率、低成本生产用于疾病防治的生物活性蛋白质、细胞、器官。 10.简述显微注射法建立转基因鼠技术路线。 目的基因（微注射）V （移植） (妊娠出生) （分子检测） 供体动物 受精卵 受体动物输卵管 动物幼崽 转基因动物 11. 简述获得2012年诺贝尔生理学或医学奖的诱导式多能性干细胞技术的原理？ ES（胚胎干）细胞和IPS（诱导多能干细胞）具有相同的基因，不同的是ES细胞中的与细胞多能性有关的基因能够表达，如oct4、Sox2等。而已分化的体细胞中的这些基因不能表达。通过导入与多能性有关的外源基因来激活体细胞中的多能性基因，从而是体细胞从分化状态重编程为多能性干细胞。 十四章、生物芯片 12.简述生物芯片的基本原理和特征？ 概念：指通过微电子和微加工技术，