基因芯片技术研究现状.pdfVIP

医学动物防制 2005 年 1 月第 21 卷第 1 期 ·3 · 基因芯片技术研究现状 王 　璐 (北京市崇文区疾病预防控制中心 　100050) 　　摘 　要 　基因芯片技术是同时将大量的探针分子固定到固相支持物上 ,借助核酸分子杂交的特性对 DNA 样 品的序列信息进行高效的解读和分析。它可用于DNA 测序、基因表达图谱的分析及突变检测等很多方面 ,具有广 阔的潜在应用价值 ,在未来的生命科学领域中必将发挥重要的作用。 关键词 　基因芯片 　　人类基因组计划是人类为了认识自己而进行的 2 　基因芯片的种类 一项最伟大和最具影响的研究计划。随着人类基因 2 . 1 　根据支持介质划分 　制备芯片的固相介质有 组计划的逐步实施以及分子生物学相关学科的迅猛 玻片 、硅片、聚丙烯酸胺凝胶、尼龙膜等。在选择固 发展 ,越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测 相介质时 ,应考虑其荧光背景的大小、化学稳定性、 定 ,基因序列数据正在以前所未有的速度迅速增长。 介质对化学修饰作用的反应 ,介质表面积及其承载 然而 ,怎样去研究如此众多的基因在生命过程中所 能力以及非特异吸附的程度等因素。目前较为常用 负担的功能就成了全世界生命科学工作者共同的课 的支持介质是玻片。 题。为此 ,建立新型杂交和测序方法以对大量的遗 2 . 2 　根据制备方法划分 　芯片制备的方法主要是 传信息进行高效快速的检测、分析就显得格外重要。 原位合成和直接点样 。原位合成适用于寡核苷酸; 基因芯片技术就是顺应这一发展要求的产物 ,它的 直接点样法多用于大片段 DNA ,有时也用于寡核苷 出现为解决此类问题提供了光辉的前景。 酸 ,甚至 mRNA 。原位合成有两种途径 , 一是光刻 1 　基因芯片技术的基本原理 法 ;一是喷印法[6 ] 。 所谓基因芯片就是按特定的排列方式固定大量 2 . 2 . 1 　原位光刻合成 　光刻法主要是利用半导体 基因探针/ 基因片段的硅片、玻片、塑料片[1 ,3 ] 。探 技术 ,在合成碱基单体的 5 , - 羟基末端连接上一个 针 DNA 是指被有序地点样固定在玻片或硅晶片上 光敏保护基 , 利用光照射使羟基脱保护进行 DNA 的DNA 片段 ,这些片段可通过 PCR 反应扩增细菌 的合成 ,在生长的链上加上一个碱基 ,这个过程反复 质粒上插入的基因组片段或用通过引物从 cDNA 文 进行直至合成完毕 ,该方法可在成千上万个位点同 库种 PCR 扩增得到。这些大小和序列不同的片段 时进行合成。 分别经过纯化后 ,被高密度有序地点样固定在玻片 2 . 2 . 2 　原位喷印合成 　芯片原位喷印合成原理与 或硅晶片上从而制备成 DNA 微阵列 ,用于检测待 喷墨打印类似 ,不过芯片喷印头和墨盒有多个 ,墨盒 测样品中是否有与之互补的序列。待测样品中的 中装的是四种碱基等液体而不是碳粉。喷印头可在 mRNA 被提取后 ,通过反转录反应过程获得标记荧 整个芯片上移动并根据芯片上不同位点探针的序列 光的 cDNA ,与包含上千个基因的 DNA 微阵列进行 需要将特定的碱基喷印在芯片上特定位置。该技术 杂交反应 ,将玻片上未互补结合反映的片段洗去 ,再 采用的化学原理与传统的 DNA 固相合成一致 , 因 对玻片进行激光共聚焦扫描 ,测定微阵列上各点的 此不需要特殊制备的化学试剂[6 ] 。 荧光强度 ,推算出待测样品中