甘蔗抗坏血酸过氧化物酶基因（ScAPX）的克隆及表达分析.pdfVIP

蒜 ．黧鎏 231152 Onlniesystem豢： rggy 鞭陆擞禳t麴…撩瓣 # … ～ ～ 甘蔗抗坏血酸过氧化物酶~ (ScAPJO的克隆及表达分析 王竹青 陈云 杨玉婷 苏亚春 陈珊珊 吴期滨 许莉萍 福建农林大学农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室，福州I350002 通讯作者，xlpmail@126．com 摘 要 抗坏血酸过氧化物酶(ascorbateperoxidase，APX)是清除活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS1的 重要酶类 。本研 究对针刺接种黑粉菌(Sporisoriumscitamineum1后的抗、感基 因型甘蔗 (Saccharum officinarum)进行APX活性测定。结果表明，甘蔗接种黑穗病菌48h内，抗病品种(崖城05—179)APX活性 显著高于感病品种(柳城03．182)(尸0．o5)。借助 电子克隆技术，结合RT-PCR方法，从甘蔗中分离到一个 基因，并命名为ScAPX(GenBank登录号：KJ7565501)。生物信息学分析显示，ScAPX基 因全长 1171 bp，包含一个 1038bp的完整开放阅读框，编码345个氨基酸。ScAPX编码 的蛋 白不含信号肽 ，推测其为 非分泌蛋 白，定位于线粒体基质和叶绿体基质中的概率分别为91．1％和88．7％。实时荧光定量PCR检测 结果显示，ScAPX在甘蔗根、芽、叶、蔗皮和蔗髓中均有表达，为组成型表达基因，表达量在蔗皮中最高，叶 中最低，前者是后者的19．7倍；在外源因子处理后0-48h，ScAPX基因的表达受水杨酸(salicylicacid，SA)、 茉莉酸 甲~(methyljasmonate，MeJA)、过氧化氢(hydrogenperoxide，H：O2)、脱落酸(abscisicacid，ABA)、氯 化钠(sodiumchloride，NaC1)和聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)诱导，SA、MeJA和H：02处理后的ScAPX 转录本积累量峰值较外源激素(ABA)和环境(NaC1和PEG)胁迫早。前者的ScAPX转录本变化呈现出胁 迫初期积累量增加，达到峰值后又逐步下降的特点；在 同样 的测试时间(处理后24h)内，ABA、NaC1和 PEG处理后ScAPX转录本在达到峰值后未见下降。虽然在外源胁迫下，ScAPX表达量变化存在明显差 异，但其表达均表现出正响应上述外源因子对甘蔗的胁迫。本研究为后续深入鉴定该基因的功能与进一 步应用提供基础资料。 关键词 甘蔗，甘蔗黑穗病菌，抗坏血酸过氧化物酶基因(ScAPX)，非生物胁迫，qRT-PCR Cloning and Expression Analysis of Ascorbate Peroxidase Gene (ScAPX)inSugarcane(Saccharumofficinarum) WANGZhu—Qing CHENYun YANGYu—Ting SUYa—Chun CHENShan—Shan WUQi—Bin XULi—Ping* KeyLaboratoryofSugarcaneBiologyandGeneticBreeding，Ministry ofAgriculture，FujianAgricultureandForestryUniversity，Fuzhou 350002，China Correspondingauthor,xlpmail@126．com Abstract Ascorbateperoxidase(APX)iSoneoftheimportantenzymeswhichcanremovethereactive oxygenspecies(ROS)intheplant．Inthisstudy,APXactivityinsugarcane(Saccharumofficinarum)smut resistantvarieyt