抗丝集蛋白抗体及抗核周因子抗体在类风湿关节炎诊断中的意义.pdfVIP

中国药物与临床2015年 1月第 15卷第 1期ChineseRemediesClinics，January2015，~o1．15，No．1 · 141 · · 医 学 检 验 · 抗丝集蛋白抗体及抗核周因子抗体 在类风湿关节炎诊断中的意义 张文军 类风湿关节炎 (RA)是最常见的风湿病之一 ，是以对称性 1．2．2．1APF抗原制备：①清洁口腔 ，用海绵涂抹两颊黏膜 ； 关节炎为主要临床表现的异质性、系统性疾病。我国RA患 ②将海绵置人 10mlpH7．4O．01mol／LPBS中，挤压海绵，使 病率为0．36％，患病总人数至少 400万l1]。RA是慢性、进行 颊黏膜脱落，细胞溶人PBS中；③80o×g离心3min，弃上清 ； 性、侵袭性疾病 ，如不给予患者适当治疗 ．病情逐渐发展加 ④加入 l0rnl含 0．5％Triton．XIO0的PBS，静置 10min后 ， 重，致残率高。因此早期治疗是关键。本文通过对 163例患者 800xg离心 3min，弃上清；⑤细胞用 10mlPBS洗涤，800xg 抗丝集蛋 白抗体 (AFA)及抗核周因子抗体 (APF)检测 ，发现 离心 3min，弃上清 ；⑥显微统下计数 ，调整细胞数至 1000／10 RA患者血清中AFA，APF具有很高的特异性。现报告如下。 ml；⑦点片，干燥后～70℃保存。 1 资料与方法 1．3．2 APF间接免疫荧光法检测：①标本血清用PBS1：20和 1．1 一般资料 ：RA组 ：2001--2003年我院内科 门诊及住院 稀释后加在原片上，放室温 1h。②用PBS洗涤3次，每次5 RA患者 163例 ，男性 64例 ，年龄 18～77岁；女 99例 ，年龄 min。③滴加 1：40稀释后的FITC标记的抗人 IgG抗体，室温 23～69岁。非 RA对照组共 71例 ．其中系统性红斑狼疮(SLE) 30min。④用PBS洗涤3次，每次5min。⑤缓冲甘油(50％甘 34例，男性 4例 ，女性 30例 ，年龄 16—55岁；强直性脊柱炎 油，50％PBS)封片，荧光显微镜(日本尼康)下观察结果。⑥结 (As)17例，男性 15例，女性 2例 ，年龄 13～36岁；系统性硬 果判断 ：观察 5个视野 (约 100个细胞)，核周均质圆形椭圆 化症 (SSC)20例，男性 4例 ，女性 16例，年龄20～6l岁。所有 形荧光颗粒为阳性细胞，I5个细胞为阳性。 标本血清分装后一2O℃保存。 1．4 统计学处理 1．2 方法 应用 SPSS10．0软件进行统计 检验，P0．05为差异有 1．2．1AFA检测：AFA抗原片基质(由德国欧蒙公司提供)为 统计学意义。 大鼠食管中段 13／的冰冻组织切片。 2 结 果 1．2．2 AFA间接免疫荧光法检测(德国欧蒙公司提供试剂)： 163例RA患者中AFA单项 阳性87例 (53．4％)，APF单 ①待测血清用于磷酸盐缓冲液(PBS)．T1：10稀释后加 25 l 性阳性 90例(55．2％)。AFA+APF两项阳性 82例 (50．3％)。阳 在加样板的每一反应区内，避免气泡 ，同时加入阳性阴性对 性确诊率AFA，APF分别为94．3％，98．5％。经校正 检验，差 照血清。②将生物薄片载片盖在加样板的凹槽里，确保每一 异有统计学意义(P0．O1)。见表 1。 样品与生物薄片接触且样品间互不接触。反应开始，室温温 表 1 2组患者中AFA、APF特异性及敏感性 育30min。③先用PBS．T轻轻冲洗掉片上的反应液，再在 PBST中浸泡，不必摇混 ，时间不少于 1min。④在加样板上 滴加羊抗人 IgGFITC20 l。⑤取出5s内，用吸水擦拭一下 背面和边缘后立即盖在加样板的凹槽里．不要擦