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第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 P．B120 利用HPLC对脂肪氨基酸柱前衍生化后的手性分析 陈实a，孙建华8，戴荣继矿+，邓玉林矿+ 8北京理工大学生命科学与技术学院，邮编：100081 使用柱前衍生化试剂通过HPLC，外消旋混合物可以被常规ODS柱分开。2，3，4，6．四．O．乙酰基 -B—D·吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯(GITC)作为一种好的手性衍生试剂，在实验室自行合成并且产率达 到44．7％。 肪族氨基酸对映体。 关键词：柱前衍生化，脂肪氨基酸，反相HPLC 1实验部分 1．1材料与仪器 葡萄糖，红磷，硫氰酸钾，液溴，甲苯，石油醚，乙酸酐，冰醋酸，二氯化锌，三乙胺，以上 均为分析纯，购买于北京偶合科技有限公司；甲醇为色谱纯，购买于FisherScientific Company；四 丁基溴化铵，白氨酸，缬氨酸均为分析纯，购买于百灵威化学技术有限公司。 BXFT-IR Elmer公司)，HPLC液相(岛津)，微孔 FTIR红外光谱仪(Spectrumsystem，Perkin 过滤膜(有机系，孔径：0．20urn，津腾)，微孔过滤膜(水系，孔径：0．45urn，津腾) 1．2GITC的合成 (1)1，2，3，4，5-五乙酰基一mD．吡喃葡萄糖(GITC(I))的合成 冷却后将混合物倒入冰水中，充分搅拌以分解未反应的乙酸酐。油状物逐渐固化，有白色沉淀生成。 过滤之后，对白色沉淀有冰水反复洗涤至无酸味。固体用乙醇重结晶，得到白色固体GITC(I)。真 空干燥8h得到固体399，产率72％，熔点107．1lO℃。 (2)2，3，4，6-四乙酰基．a．D．吡喃溴代葡萄糖(GITC(II))的合成 冰浴滴加，控制温度低于20C。滴加完毕后室温继续搅拌至红磷完全溶解，大概30分钟。将 物倒入冰水中，过滤后分出有机层，水层有氯仿萃取后，合并有几层。有几层分别用水、Na2C03溶 液洗涤，无水Na2S04干燥。过滤后旋转蒸发除去溶剂，所得乙醚重结晶。得到白色固体59，产率73．2％，。 熔点88．89C。 (3)GITC的合成 回流搅拌4h。反应结束后降至室温，过滤后滤液浓缩得到粗品，用甲苯石油醚混合液重结晶，干燥 后得到GITC 1℃。 0．19，熔点110．11 1．3GITC与脂肪氨基酸衍生化 取5 mL mg的氨基酸置于10mL的容量瓶中，加入含4g／L三乙胺的50％(币)乙腈水溶液，配成10 的溶液。取50皿该溶液，加入50此含2g／LGITC的乙腈溶液，混合均匀后室温下放置10min，即 可衍生完毕。衍生示意图如图l所示。 “通讯联系人，戴荣继，Email：dairongii@bit．edu．cn ”通讯联系人，邓玉林，Email：deng@bit．edu．cn 702 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 船+又呲 皿人 图1GITC与脂肪氨基酸衍生化示意图 2结果与讨论 2．1氨基酸的HPLC分析结果 所合成的葡萄糖基异硫氰酸酯(GITC)与DL．氨基酸异构体柱前衍生后，在反相高效液相色谱 nm。 (MeOH／1％TEAA，pH5．5)为流动相，流速ImL／min，进样量为每次209L，紫外检测波长为254 结果重现性好，方法切实可行，与价格昂贵的手性柱拆分对应异构体相比，该方法可以大大降低分析成 本。 f