1株牛变形杆菌的分离鉴定和其药物敏感性研究.pdfVIP

142 第五届全国牛病防治与产业发展研讨会论文集 1株牛变形杆菌的分离鉴定及其药物敏感性研究 张熠，杨宝凤，李能章，李海娥，李春明，袁晓娟，冯思源，马建伟，彭远义” 5) (西南大学动物科技学院重庆市牧草与草食家畜重点实验室，重庆40071 摘要：从重庆市某肉牛场病牛关节液中分离到1株细菌，经细菌形态和培养特性观察、生化试验、小鼠攻毒试验及 6S 细菌1 rRNA基因序列分析，判定该菌为变形杆菌。药敏试验表明，分离菌株对头孢呋辛、丙氟哌酸等药物敏感。 关键词：牛；变形杆菌；分离鉴定 变形杆菌病是由变形杆菌引起的一种急性热性传染病。国外学者陆续发现了变形杆菌能感染多种动 物，但在国内很少见到牛变形杆菌感染动物发病报告。该菌一般从病死动物的心、肝上分离，对于从关节 液中分离到变形杆菌，国内尚未见报道。因此，对变形杆菌进行分离鉴定，明确变形杆菌所引起的疾病在 我国牛群中的流行情况，对疾病的防治具有重要意义。 变形杆菌属于肠肝菌科变形杆菌属，变形杆菌属根据生化反应不同可分为普通、奇异、莫根、雷极和 无恒变形杆菌五种，其中以奇异变形杆菌致病性较强。本菌为革兰氏阴性杆菌，形态多样，呈球形、长而 弯曲状或长丝状。在固体培养基上呈迁徙性、弥漫性生长，依赖周鞭毛运动，十分活泼‘1埘。 2013年8月，重庆市某肉牛场的部分新进犊牛只相继发病并引起死亡，临床症状以拉稀为主，部分病 牛关节肿大、化脓。经流行病学、细菌学、病理学综合诊断，确诊为犊牛变形杆菌病。 1材料与方法 1．1实验材料 1．1．1病料来源 重庆某肉牛场病牛关节液。 1．1．2实验动物 18 g～269普通级成年昆明小鼠，购自重庆市腾鑫比尔实验动物销售有限公司。 1．1．3药敏试纸和分子耗材 红霉素、氯洁霉素等22种常用抗生素药敏试纸片，购白杭州微生物试剂有限公司。ProteinaseK、细 dNTP 的混合物，购自宝生物工程(Jc连)有限公司；Taq Ladder 购自北京鼎国公司。 基金项目：国家现代农业(肉牛牦牛)产业技术体系建设专项基金资助(CARS．38)。 作者简介：张熠(1988)，男，硕士研究生，主要从事动物微生物学与免疫学研究。 +通讯作者：彭远义，男，博士，教授，E-maih pyy2002@sina．corn。 第五届全国牛病防治与产业发展研讨会论文集 143 1．2实验方法 1．2．1病原分离培养与镜检 无菌操作下，取节液接种于马丁琼脂培养基上，于37。C条件下培养24小时后，挑取单菌落分别接种 于马丁琼脂培养基、麦康凯培养基，37。C条件下培养24小时，观察细菌的生长情况。挑取纯培养物进行 染色镜检。 1．2．2生化鉴定 无菌条件下，挑取纯培养物按常规方法进行生化试验。 1．2．3致病力检测 将分离关节液的细菌分别接种于马丁肉汤液体培养基，37。C条件下培养24小时，分别腹腔接种3只 小白鼠，0．2 ml／只，对照组注射等体积马丁肉汤液体培养基，观察其精神状态、食欲等，记录每只小白鼠 死亡时间。 1．2．4 16SrRNA序列测定 16S R： 设计病原菌 rRNA序列通用引物(F： min；94℃变性1 基因组，PCR扩增其16SrRNA基因序列，扩增条件为：95℃预变性5 min；58℃退火 30 S；72℃延伸2min，30个循环后72℃延伸10min。l％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，并送上海生工 树。 1．2．