2-型猪链球菌疫苗候选分子FBPS的表达和纯化研究.pdfVIP

第九届全军流行病学·第八届全军防生物危害医学专业学术会议论文集 2．型猪链球菌疫苗候选分子FBPS的表达及纯化研究 刘丽娜胡福泉朱军民赵岩李明唐家琪 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 南京军区疾病预防控制中心流行病微生物学研究所南京210002 2一型猪链球菌(Streptococcussuis，S．suis)是造成养猪业重大经济损失的病原之一，同时也 是一种重要的人畜共患病病原体。迄今，国外报告的人类感染病例己达200余人，但多为散 在发病。近年，我国江苏省(1998年)和四川省(2005年)分别暴发了人感染2一型猪链球 toxicshock 菌事件，出现了“中毒性休克综合征”(Streptococcalsyndrome，STSS)这一新的临 床类型，病死率高达60％～80％，引起了全世界的广泛关注。作为一种新出现突发传染病，严 重威胁着我国养猪业和人类健康。 目前，根据荚膜多糖的抗原性，可将猪链球菌分为35个血清型，其中血清2型毒力最强、 流行最广。已知与2一型猪链球菌致病性相关的毒力因子主要有荚膜多糖(CPS)、溶茵酶释 released 放蛋Et(muraminidaseprotein，MaP)、细胞外因予(extmcellularfactor，EF)、溶血素 蛋I刍(fibronectin．bindingprotein，FBPS)作为2一型猪链球菌的。‘种黏附素，是新近鉴定的…种 毒力冈子，现已证实2一型猪链球菌能通过FBPS与纤连蛋白结合，促进细菌黏附于宿主组织和 侵袭宿丰细胞。 本课题组依据反I向疫苗学的原理，以2．型猪链球菌仝基凶组序列和功能注释为基础，进 行2．型猪链球菌组分疫苗的研究。通过牛物信息学方法的全面分析与预测，最后我们锁定了25 个抗原候选分子，拟埘其进行表达和纯化，FBPS就是其中之～。本研究以四川省资阳市人源2 续动物攻击试验验证其抗原保护活性，从而为2一型猪链球菌疫苗研究奠定丛础。 l材料与方法 1．1材料 2一型猪链球菌临床分离株05ZY／H33…南京军区军事医学研究所从四川省资阳市2一型猪 链球菌感染病人中分离鉴定并全基因组测序；E．coli．DH5alll本实验室培养和保存；E．coli． DNA聚合酶、dNTP、限制性 Rosetta由中科院水生所馈赠；质粒pET30b为本室保存；Ex．Taq I、XhoI、T4 DNA 核酸内切酶BamH DNA连接酶均购白大连TaKaRa公司；lkbMarker购白上 海生工生物工程技术服务有限公司；蛋白质分子量标准购白上海中科院；胶回收试剂盒、质 粒提取试剂盒购自上海华舜生物工程有限公司；Ni-NTA纯化系统购自美国B10．RAD公司； HRP标记的羊抗人lgG一--抗购自晶美生物工程有限公司；引物合成…大连TaKaRa公司完成； DNA测序…上海英骏牛物技术有限公司完成：其他试剂均为I嗣产分析纯。 1．2方法 1．2．1 2一型猪链球菌培养液，按《精编分子生 2一型猪链球菌丛冈组DNA的提取取lml 物学实验指南》中常规细菌丛冈组DNA提取方法操作。 1．2．2 fbps编码基凶的扩增根据2一型猪链球茼仝基凶组序列·I·fbps基凶序列，利用引物 设计软件Primer GCAGGATCCGATGTCTlTrGACGGATTT．3’带BamHl酶切位点，Pr的序列为：5’- GcAcTCGAGGATTTTCATGGAn丁TAT一3，带XhoI酶切位点。以2一型猪链球菌I‰床分离 第九届全军流行瘸学·第八屠全军防生锈危害医学专曼学术会议论文集 PCR产物以1％琼脂糖凝胶电泳分析，观察扩增结果并回收PCR产物． 12．3重组载体的构建回收的PCR产物用BamH