应用单抗鉴别高致病性猪繁殖和呼吸综合征病毒的研究.pdfVIP

第三届猪病防控学术研讨会会议论文集 据报道，在PRRSV6种结构蛋白中，由ORF7编码的核农壳蛋白具有较高的保守性，在病毒粒子 中含量较高，约占病毒夤白总量的20％-40％，而且N蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。试验表 明，猪感染PRRSV后9～lld，机体首先产生针对该蛋白的抗体，随后产生的才是针对其他蛋白的抗 体，并且这种抗体可持续1年以上。因此根据这种特性，N蛋白在PRRSV诊断方法的研究上具有较高 的价值。但是该抗体不具备中和活性，这是因为N蛋白位于PRRSV的内部，特异性抗体难以与N蛋 白接触从而阻止了抗原抗体反应的缘故。 本人运用分子生物学技术和基因工程技术，对在PRRSV两个基因型中都相当保守的核农壳蛋白 基因进行扩增与克隆，并连接到原核表达载体pET32a中，构建了高效可溶性重组表达载体 完全可以满足需要建立N．ELISA诊断方法的需求。因此，本试验利用上述蛋白的纯化产物建立了检 者在准确性上仍存在一定差异，但笔者认为通过对方法的改进和条件的优化，可实现工艺流程的大 量制备，从而降低了生产成本和检测费用，为猪繁殖与呼吸综合征病毒全国范围内的流行病学调查 奠定了一定的理论基础和物质基础。 参考文献(略) 应用单抗鉴别高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究事 陈仕龙1．一，黄梅清1．一，林天龙2-一，江斌1，庄向生1一，陈少莺1，3 (L福建：张j坪障院畜等镛压毋院既2福建馘j饼僦辛材划泖院阮1福建酌澈痈纬治雄}斟溺院中·过福建福州3劝B) PRRSV不同毒株免疫荧光鉴别诊断方法的建立为临床高致病性PRRSV的确诊提供了可靠的验证手段． 关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒，单抗．免疫荧光抗体试验、鏊烈诊断 and 猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiverespiratory 猪业的传染病，主要特征为母猪繁殖障碍、仔猪与生长猪的呼吸系统症状。该病自1987年在北美洲 首次发现以来，现已遍布全球，我国大陆于1996年首次在猪群中流行美洲型PRRSV。2006年夏季以 来，一种新的高发病率和高死亡率的传染病(俗称“高热病”)在我国南方省市猪群中流行，经专家 的联合攻关，查明此次疫情主要是由美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株(高致病性猪繁殖与呼 and reproductive syndromevirus．HP．PRRSV)引 吸综合征病毒，highlypathogenicporcine respiratory 起。 异，现有能检测病原的免疫学快速诊断方法不能区分PRRSV美洲株和HP．PRRSV毒株。目前，鉴别 HP．PRRSV的鉴别诊断，但操作繁琐、实验条件要求高，不适合兽医基层单位和快速诊断的要求。 因此，快速、准确、简便的诊断试剂盒的研发将具有潜在的市场前景。 本研究选用8株分离自“高热病”的PRRSV毒株、2株欧洲株和2株美洲型传统毒株为供试毒株，以 流行病学研究和PRRSV的鉴别诊断。现将结果报告如下： ·项目来躁：福建省畜牧重大专项子专题(编号：2006NZ003-2)和2008年福建省平}技计划项目 作者篱贪：踩仕龙(1979．)。男，福建省宁他县人。助理研究受，主要从事动物传染病免疫学研究； 183 病毒病 l材料和方法 1．1病毒及抗体 1．2试剂 贸发展有限公司。 1．3 PRRSV感染细胞的制备 固定30min，甩干。PBS洗涤1次，一30℃冻存备用。同时设正常Marc．145细胞为阴性对照。 1．4间接免疫荧光试验(Ⅱ溘) 30此，于37℃作用30min，用PBs洗涤3次；每f乙钿l：100稀释的羊抗小翮gG．FITC30皿，于37℃作用30rain， 用PB蹦皂涤3次，加50％甘油-PBS，每?L30蛐L，于倒置荧光显微镜下观察，拍片记录结果。按业匕方法，设；个重 复试验。 1．5 RT-PCR 次。 2结果 2．1间接免疫荧光抗体试验(IFA) 不能与供试的二株单抗反应(见表1)。 表l 间接免疫