载药组织工程皮肤体外生物学性能研究.pdfVIP

第13届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文集——基础篇 载药组织工程皮肤体外生物学性能的研究 天津市天津医院骨科研究所张杨李秀兰师宜健 皮肤作为人体最大的器官，具有复杂的生理结构和多种重要生理功能。当皮肤遭受严重烧伤、创伤、 感染及糖尿病顽固性皮肤溃疡等损害时，大面积皮肤缺损的修复与重建成为棘手的难题。本研究旨在利用 自体皮肤细胞分离获得的种子细胞，短时间扩增，将生肌液这一高效免疫激活因素与载体支架复合后构建 细胞—载药载体复合物，使种子细胞在生肌液与明胶一壳聚糖支架材料构建的复合支架中增殖，构建载药 组织工程皮肤，为皮肤损伤的治疗探索一条新途径。 1材料方法 1．1 生肌液对皮肤种子细胞增殖的影响 1．1．1 1：100生肌液(培养液中生肌液浓度 lOmg／m1)、l：60生肌液(培养液中生肌液浓度为8mg／m1)、 8mg／m1)、EGF(培养液含EGFlong／m1) 1．1．2 个／nil，接种于96孔板，每组平行5孔。培养l天待细胞完全贴壁后更换条件培养液。 1．1．3 |II， u 37℃孵育4小时。弃去孔中所有MTT，每孔加入100l二甲基亚砜，振荡混合，以未接种细胞的 孔作为空白对照测定570nm的吸光度值。 1．1．4所得数据以SPSS软件进行统计学处理。 1．2载药支架对细胞粘附的影响 1．2．15种材料(非载药支架—基质材料中不含生肌液、1：5载药支架—基质材料中含生肌液浓 的圆片，C060照射消毒，放置于24孔板中。 1．2．2 孔板。 1．2．3每隔3天更换新培养液，分别于培养7天、14天取材，石蜡包埋后作普通病理切片，HE 染色后计数每个高倍视野(400倍)中细胞数，每个标本观察6个视野，计数平均值，作半定量检i蜒!i。 1．3细胞与载药载体支架的生物相容性一组织学与扫描镜观察 1．3．1 非载药支架、l：5载药支架、1：8．5载药支架C060照射消毒，在6孔板中分组放置。 1．3．2第3代KC以常规方法消化成为单细胞，调细胞浓度为2×105个／ml，接种于6孔板，每 隔3天更换新培养液。 一77— 第13届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文集——基础篇 1．3．3分别于4天、7天、14天取材，电镜固定液固定过夜，50％、75％、95％、无水乙醇逐级 脱水、真空干燥，分别进行扫描电镜观察和HE染色。 2结果 2．1 生肌液对皮肤种子细胞增殖的影响 2．1．1KC：除EGF组外其余各组增殖曲线形状一致，EGF组第1天时显著升高，与对照组有显著 生地提取液组5、7天均高于对照组，有显著性差异(P0．01)；当归提取液组l、3天明显下降，与对照 组有显著性差异(PO．05=；两种单味药与生肌液组方升高的时间点不同步(图2)。 2．1．2FB：当归、生地提取液组第1、3天时升高，EGF组第l天时升高，均与对照组有显著性差 性差异(P0．05；高浓度组在第1天时稍有下降，但无统计学差异。(表1) 表1刺激因素对FB增殖的影响(n_5) 幸：P0．05，幸·：P0．01 2．2载药支架对细胞粘附的影响 载药材料组，特别是中等浓度组细胞获得较多增殖(表2)。 表2细胞在载体上增殖半定量检测试验 +每个高倍视野(400倍)中细胞数0．5个 ++每个高倍视野(400倍)中细胞数5．10个 卅每个高倍视野(400倍)中细胞数lO以上 2．3细胞与载药载体支架的生物相容性一组织学与扫描镜观察 --78。—— 第13届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文集——基础篇 2．3．1 HE染色结果：无论材料是否载药，KC大部分在材料表面生长，细胞形态良好，药物对细 胞无明显毒性作用(图3、．4)。 2．3．2扫描电镜观察：细胞在载体表面及孔隙中生长，与材料紧密贴附，细胞形态良好(图5．7)。 3讨论 皮肤损伤修复是细胞、