超嗜热菌Aquifez+aeolicus亮氨酰-tRNA合成酶地研究.pdfVIP

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2017-08-19 发布于安徽
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大会专题报告 aeolicus亮氨酰。量RNA合成酶的研究超嗜热菌Aquifex 王恩多 (分子生物学国家重点实验室，申圈科学院土海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，上海200031) aeolicus(A 超嗜热菌Aquifex 中分别克隆了oc和§眨基的基因，发现伐亚基不能以可溶性蛋白质表达；p亚基则可稳定表达，具有耐热性。纯化的D亚基无氨基酰化活力，但可在体内或体外结合tRNALeu。但双亚基基因在大肠杆菌中共表达，可得到纯度为95％以上豹酶。基于p亚基和tRNALeu结合的性质我们建立了酵母三杂交系统，通过这一系统鉴定了与tRNALeu结合的酶分子上的重要结构域。构域对于minihelixLeu的识别也是至关重要的。似的功能，通过大肠杼菌CPl与多驻基的融合，大肠杆菌CPl结构域也具有了编校功铙。性，其编校结构域可能保留了三种酶共同的祖先编校结构域，它应当具有非专一性的编校前、依赖tRNA转移前和依赖于tRNA转移后的三条编校途径进行编校。用突变的手段分离了两条依赖于tRNA的编校途径。发现它通过分子内结构域问的通讯负反馈氨基酰化活力从丽进一步保证遗传的忠实性。