叶绿素a监测方法改进的探讨.pdfVIP

·1602· 中国环境科学学会学术年会优秀论文集(z007) 叶绿素a监测方法改进的探讨 范天瑜吴青文 梁胜文 周新萌 王杰 (武汉市环境监测中心站430061) 。 ● 摘要利用超声波能够破碎细胞的原理，解决叶绿素a监测方法中存在的由于不同的细胞破碎方式 产生的系统操作误差的问题。并提出快速测定叶绿素a监测方法，减少原方法中引起健康安全性的 问题。 关键词 叶绿素a超声波细胞破碎组织研磨器安全性 质量保证是环境监测工作中的重要步骤，各实验室提供的监测数据要具有足够的准确性和可 。、 比性。但目前的叶绿素a监测方法不可能达到这一要求，很有改进的必要。． 一、实验原理 绿色植物都具有色素，以进行光合作用。叶绿素广泛存在于藻类等绿色植物组织中，并在植 物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。藻类和其它绿色植物一样具有叶绿素a等多种色素，叶绿素是 植物光合作用中的重要光合色素。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳 定，对光、热较敏感；在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿 色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况。在 环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化的指标之一。 · 测定叶绿素a含量的方法有多种，其中主要有：①原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含 量，进而间接计算叶绿素的含量。②分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收 波长下的吸光值，即可用朗伯一比尔定律计算出提取液中各色素的含量。目前环境监测中采用的 测定叶绿素a的②方法，其中试验程序部分如下： (一)试验程序 ． 。 1．以离心或过滤水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。倒人定量体积的水样进行抽滤，抽 滤时负压不能过大(约为50kPa)。水样抽完后，继续抽1—2rain，以减少滤膜上的水分。 如需短期保存1—2d时，可放人普通冰箱冷冻，如需长期保存(30d)，则应放入低温冰箱 (一20。C)保存。 2．取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6—8h后放入组织研磨器中，加入少量碳 lOmin。将上清液倒入5ml或lOml容量瓶中。 ， 3．用2～3ml的90％的丙酮，继续研磨提取，离心lOmin，并将上清液再转入容量瓶中。 重复1～2次，用90％的丙酮定容为5ml或lOml，摇匀。 630mn波长的吸光度，并以90％的丙酮作空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。 (二)叶绿素a监测方法目前存在的问题及解决方法实验机理 1．操作误差。同一样品不同人员做实验结果有差异。同一人员重复做结果也有差异。 2．分析误差。由于定容量少(5一lOml)，用丙酮重复清洗不完全，样品玷污在玻璃器皿上， 结果偏低，导致分析结果出现误差。 3．安全性。由于丙酮挥发性大，若实验人员操作时间过长，有害健康。组织研磨器是玻璃 制品，操作时易出安全问题。 一第五章环境监督管理制度建设 4．解决方法。由于机械研磨和超声波都可以使生物细胞的组织结构破坏，便于丙酮萃取叶 绿素a。只需将细胞破碎的时间、频率、频次进行统一。就可使叶绿素a检测方法有重复性，可 比性。进而达到准确性。 (三)实验过程 1．以离心或过滤水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。倒入定量体积的水样进行抽滤，抽 滤时负压不能过大(约为50kPa)。水样抽完后，继续抽12min，以减少滤膜上的水分。 如需短期保存1～2d时，可放人普通冰箱冷冻，如需长期保存(30d)，则应放入低温冰箱 (一20℃)保存。 2．取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6—8h，用剪刀剪碎后，放入5ml或lOml 离心管中，加入3—4lIll90％丙酮，使碎片没入液面下，放人超声波容器中用超声波